斜帶石斑魚Sox11a cDNA的克隆，表達及功能分析.pdf

1、本文利用PCR篩庫法成功地從2齡斜帶石斑魚的全腦cDNA文庫中篩選出一種SRY相似基因，全長為1488bp。由于它編碼蛋白的HMG區(qū)域同斑馬魚Sox11a蛋白的HMG區(qū)域完全相同，而命名為grSox11a。Northern雜交表明該基因的mRNA全長為3.0Kb，在嗅球、中腦、全腦組織中都檢測其表達，表明grSox11a它在中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育中起著作用。結(jié)合Northern雜交和序列分析表明，在全腦cDNA文庫中，GrSox11a發(fā)生了提

2、前反轉(zhuǎn)錄，而造成cDNA大小與mRNA大小不符合。本文采用3'RACE方法，以前腦總RNA產(chǎn)物為模板，克隆了完整的grSox11acDNA，其全長為3.0kb，與Northern雜交結(jié)果相符合。Northern雜交和RT-PCR&Souhtern雜交表明，grSox11a在中樞神經(jīng)系統(tǒng)都有高豐度的表達，表明了grSox11a同其它動物的Sox11基因一樣，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中起著相似的功能。而Northern雜交可在成熟的卵巢和間性性腺檢測

3、了Sox11a的表達，表明了grSox11a不完全相同于高等脊椎動物的Sox11，其也在性腺發(fā)育或性腺逆轉(zhuǎn)中起著相當重要作用。Southern雜交表明，grSox11a在基因組只存在一個拷貝。　　一步法RT-PCR&Southern雜交表明：GrSox11a除了在中樞神經(jīng)系統(tǒng)有表達外，在外周組織也存在廣泛的表達，但是在肝臟、脂肪、血液中表達量較低。在胚胎和仔魚發(fā)育過程中，一直都有表達。通過亞克隆技術(shù)將grSox11a編碼HMG區(qū)域的序