斜帶石斑魚CD8α和CD8β基因克隆及表達(dá)模式分析.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文斜帶石斑魚CD8α和CD8β基因克隆及表達(dá)模式分析姓名：徐勝威申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：水生生物學(xué)指導(dǎo)教師：吳金英20100609中山大學(xué)碩士學(xué)位論文徐勝威通過RealtimeRTPCR技術(shù)，檢測CD8a和CD8D在各組織和胚胎發(fā)育期間的表達(dá)譜，研究了斜帶石斑魚CD8a和CD813的時(shí)空表達(dá)情況，并探索了LPS、PolyI：C、ConA和PHA對斜帶石斑魚頭腎淋巴細(xì)胞CD8a和CD8D基因表達(dá)情況的影響。定量結(jié)果表明，

2、CD8a和CD8fl基因在胸腺中的表達(dá)量最高，在其它免疫相關(guān)組織中也有少量表達(dá)，而在胃和肝臟中表達(dá)量極少。在胚胎發(fā)育中，多細(xì)胞期的CD8表達(dá)量明顯高于其它時(shí)期，肌節(jié)出現(xiàn)期也有較多表達(dá)。CD8在多細(xì)胞期轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的大量出現(xiàn)意味著這個(gè)時(shí)期可能是合成CD8轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的關(guān)鍵期。此外，體外淋巴細(xì)胞刺激實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明LPS對淋巴細(xì)胞中CD8的表達(dá)影響甚小，而在PolyI：C、ConA和PHA刺激組中，CD8的表達(dá)水平在2h后都有了提高，在4h時(shí)達(dá)到了最高

3、表達(dá)水平，之后表達(dá)量持續(xù)下降，呈現(xiàn)明顯的時(shí)間依賴效應(yīng)，與CD8B相比，CD8a的表達(dá)水平更容易受到這三種分裂素的影響。為了進(jìn)一步研究斜帶石斑魚CD8的生物學(xué)功能，我們利用pET32a()質(zhì)粒構(gòu)建了表達(dá)CD8a成熟肽胞外區(qū)的重組質(zhì)粒，并將該重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21中。之后，我們對表達(dá)條件進(jìn)行了IPTG的誘導(dǎo)濃度和誘導(dǎo)時(shí)間上的優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)在37℃，07mMIPTG濃度誘導(dǎo)4h后可獲得高產(chǎn)量的重組蛋白。關(guān)鍵詞：CD8，斜帶石斑魚，克隆，表達(dá)