三黃雞CD8α-βcDNA克隆與表達及其多克隆抗體的制備.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本實驗室對雞MHC Ⅰ(BF)、β2m、TCR和CD4進行了一系列研究，尤其是對BF2復(fù)等位基因和雞β2m蛋白的二級結(jié)構(gòu)及其復(fù)合體結(jié)合禽流感病毒多肽進行了研究。為了推進BF2-多肽-TCR以及CD8組裝體的精細結(jié)構(gòu)及其呈遞病毒抗原多肽的研究，本文克隆了三黃雞CD8α和CD8β鏈的cDNA，表達和純化了其重組蛋白(rChCD8α/β)，并分別制備了其多克隆抗體。 首先從三黃雞cDNA文庫克隆了CD8α和CD8β胞外區(qū)cDNA，構(gòu)建

2、了pQE30/ChCD8α/β原核表達系。經(jīng)誘導(dǎo)表達、親和層析，SDS-PAGE分析，獲得了純化的rChCDSα/β。將rChCD80α/β分別免疫Balb/c小鼠制備了其多克隆抗體。結(jié)果表明克隆的三黃雞CD8α胞外區(qū)(ChCD8α)長483bp。編碼161個氨基酸?？稍贓.coli JM109中高效表達，rChCD8α分子量為24.0kD，表達量占菌體蛋白量的25.0％；鼠抗rChCD8α的ELISA效價為1:1，024，000。Ch

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