NSE基因的克隆,表達(dá)純化及多克隆抗體的制備.pdf

1、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(Neuron specific enolase)是糖酵解途徑中一種重要的生物酶，其特異性存在于神經(jīng)元、神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞中。血清NSE水平的變化作為敏感的病理學(xué)標(biāo)志蛋白以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷時(shí)的定量指標(biāo)正逐漸被重視，且血清NSE已成為小細(xì)胞肺癌(SCLC)診斷中最敏感的腫瘤標(biāo)志物。隨著研究的進(jìn)一步深入，非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)神經(jīng)內(nèi)分泌化逐步引起人們的重視，神經(jīng)內(nèi)分泌產(chǎn)物NSE在NSCLC中的地位也越來(lái)越受關(guān)注?？傊?/p>

2、NSE作為神經(jīng)內(nèi)分泌性質(zhì)腫瘤的標(biāo)志物及神經(jīng)元損傷的標(biāo)志物，已越來(lái)越受?chē)?guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注。
　　 在這個(gè)大背景下，為了進(jìn)一步研究NSE在腫瘤與臨床方面的意義與應(yīng)用。我們通過(guò)基因工程技術(shù)構(gòu)建了帶有GST標(biāo)簽和His標(biāo)簽的NSE原核表達(dá)載體，將構(gòu)建好的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化原核宿主菌，表達(dá)和純化了NSE融合蛋白。并用NSE融合蛋白作為抗原免疫新西蘭家兔。當(dāng)我們收集到大量高效價(jià)的多抗兔血清后，對(duì)這些兔多抗血清進(jìn)行純化，采用了兩種方法：一種是用Pro