空腸彎曲菌peblA和cadF的克隆表達及多克隆抗體制備與純化.pdf

1、空腸彎曲菌(Campylobacter ieiuni)是一種導致人類發(fā)生急性腸炎與食物中毒的、危害僅次于沙門氏菌和志賀氏菌的人畜共患病原菌。建立空腸彎曲菌快速的檢測方法,是有效預防和控制其疾病發(fā)生的重要手段。
　　 通常檢測空腸彎曲菌的方法有分離培養(yǎng)方法、生化檢測、免疫學檢測、分子生物學方法等。免疫學快速篩查方法在病原微生物的檢測中具有重要的應用價值,目前在空腸彎曲菌的快速檢測方面,相關(guān)產(chǎn)品及技術(shù)甚少。
　　 獲得針對空

2、腸彎曲菌的特異性抗體,是建立空腸彎曲菌的免疫學快檢方法的首要前提。為此,本文開展了以下研究。
　　 本文首先在大量文獻調(diào)研的基礎(chǔ)上,確定了空腸彎曲菌的外膜蛋白PEB1、CadF作為特征性抗原。其編碼的基因序列相對保守,且在不同的血清型空腸彎曲菌中均有表達,提示可作為檢測抗原。
　　 采用分子生物學的技術(shù)手段,本文成功克隆表達了PEB1和CadF兩種外膜蛋白,利用鎳離子親和柱純化了表達產(chǎn)物。以PEB1和CadF兩種純化蛋白

3、免疫新西蘭長耳兔,分別制備了相應的多克隆抗體,其效價分別為1:1024000和1:128000。
　　 本文利用斑點雜交的方法,發(fā)現(xiàn)PEB1抗血清與綠膿假單胞菌、金黃色葡萄球菌、保加利亞乳桿菌、福氏志賀菌等存在交叉反應,CadF抗血清與普通變性桿菌、副溶血弧菌、單增李斯特菌、金黃色葡萄球菌和短雙歧桿菌等存在交叉反應。為此,本文采用辛酸硫酸銨沉淀法,去除了血清中的雜蛋白。進一步采用磁珠法,消除了兩種抗血清與上述微生物的交叉反應,獲