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1、目的：構(gòu)建重組質(zhì)粒并原核表達(dá)人Cystatin C，制備其鼠源性單克隆抗體和兔源性多克隆抗體并鑒定其生物學(xué)活性，分析Cystatin C 在食管癌和胃癌組織的表達(dá)分布情況。
方法:從人的胃癌細(xì)胞AGS 上克隆擴(kuò)增Cystatin C基因，構(gòu)建pET44-Cystatin C 重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化于大腸桿菌表達(dá)菌株BL21（DE3）獲得重組人Cystatin C 蛋白。以復(fù)性后的純化CystatinC 包涵體蛋白免疫BALB/c
2、小鼠和新西蘭兔，從而制備鼠抗人Cystatin C 單克隆抗體和兔抗人Cystatin C 多克隆抗體。經(jīng)Western Blot和ELISA 方法鑒定單克隆抗體及多克隆抗體的特異性。應(yīng)用免疫組化技術(shù)和RT-PCR 等方法檢測(cè)人Cystatin C 在胃癌食管癌組織表達(dá)情況。
結(jié)果：成功構(gòu)建了人Cystatin C 重組質(zhì)粒并獲得其純化原核表達(dá)蛋白。免疫印跡實(shí)驗(yàn)和ELISA 實(shí)驗(yàn)提示所制備單克隆抗體和多克隆抗體對(duì)天然人Cy
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