土霉素單克隆抗體的制備.pdf

1、土霉素（OTC）作為四環(huán)素類獸藥，由于其抗菌譜廣，價格低廉，療效好等優(yōu)點，被廣泛應(yīng)用于預(yù)防和治療動物疾病等方面，同時土霉素對于動物的生長發(fā)育也有一定的促進作用，因而常常作為飼料添加劑在飼料中大量添加，但是如果不正確使用，不遵守休藥期的規(guī)定，就會在動物體內(nèi)殘留，一旦人食用這類動物性食品后，在食物鏈作用下就會進入人體并不斷富集，積累到一定量時，就會對人類健康造成危害。因此，開展并加強對動物性食品中土霉素的殘留檢測是十分必要的。目前，世界上許

2、多國家對動物性食品中的四環(huán)素類藥物都有最高殘留限量(MRL)的規(guī)定，一些國家甚至規(guī)定不得檢出四環(huán)素類藥物。
　　檢測土霉素的傳統(tǒng)方法如毛細(xì)管電泳、超臨界流體色譜、色譜檢測法、紫外-可見光分光度法等需要大型的昂貴的分析儀器，不適合用于現(xiàn)場檢測，且檢測費用較高，檢測過程繁瑣，檢測所需的時間長，難以對動物性食品進行快速、現(xiàn)場檢測。免疫學(xué)檢測技術(shù)則彌補了常規(guī)檢測的缺點，其檢測過程簡便，檢測的時間短，成本低，且檢測所需的儀器輕便，可帶到現(xiàn)場

3、進行檢驗。如要建立土霉素快速免疫檢測方法，則抗土霉素的特異性單克隆抗體的制備是其必要條件。本研究的目的在于制備 OTC人工抗原，用人工抗原免疫小鼠，通過細(xì)胞融合獲得能夠分泌抗土霉素的特異性單克隆抗體的細(xì)胞株，為建立起免疫學(xué)快速檢測方法提供基礎(chǔ)。
　　本研究用 BSA（牛血清白蛋白）、OVA（卵清白蛋白）作為載體蛋白，采用碳二亞胺法將載體蛋白分別與土霉素偶聯(lián)，成功制備了土霉素的人工抗原。用紫外分光光度法對人工抗原檢測，人工抗原 BS

4、A-OTC的吸收峰相對于 OTC、BSA的吸收峰均發(fā)生偏移，OVA-OTC的吸收峰相對于 OVA、OTC的吸收峰發(fā)生了峰的疊加；用 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）對人工抗原檢測，人工抗原相對于各自的偶聯(lián)蛋白遷移速率均較慢；顯色反應(yīng)表明人工抗原中含有OTC特有的酚羥基，進行了鑒定，證明人工抗原偶聯(lián)成功。
　　本研究利用制備出的人工抗原 BSA-OTC免疫 BALB/c小鼠，成功獲得了針對土霉素的特異性抗體，用50％聚