牛乳鐵蛋白單克隆抗體的制備.pdf

1、目的：以牛乳鐵蛋白為抗原，通過動物免疫、間接ELISA方法建立、細胞融合、陽性克隆篩選、亞克隆等步驟，獲得能分泌抗體的單克隆細胞株，并制備、純化腹水，進行效價和特異性鑒定，以獲得效價高、特異性強的單克隆細胞株，為下一步研制BLF檢測試劑盒奠定基礎(chǔ)。 方法：結(jié)合國內(nèi)外文獻報道，依據(jù)本實驗室的具體情況，將一定量牛乳鐵蛋白與弗氏佐劑混合充分乳化，免疫BALB/c小鼠，100μg/只，共免疫4次(間隔2周)；采血測定血清抗體效價并建立間

2、接ELISA方法，待血清效價大于1:3000時進行細胞融合。取血清效價高的BALB/c小鼠脾細胞與SP2/0骨髓瘤細胞在PEG1500的作用下進行細胞融合；使用已建立的間接ELISA方法進行篩選，陽性孔采用有限稀釋法進行亞克?。旱玫降膯慰寺〖毎赀M行擴大凍存及腹水制備。腹水進行效價測定；使用試劑盒測定其抗體亞型，進行抗體純化、純度及特異性檢測。 結(jié)果：4次免疫后小鼠抗體效價達到1:6400以上。以PEG1500進行細胞融合，融合

3、孔為296孔，融合率達到77.08％。經(jīng)間接ELISA篩選，共得14個陽性孔，陽性率為3.65％。兩次亞克隆后得到兩株單克隆細胞株：3C9、4E11。經(jīng)腹水制備、效價檢測等試驗，最終確定兩者抗體亞型均為IgG2b、k型，SDS-PAGE檢測純度較高。將純化單抗與牛乳中酪蛋白、α-乳清蛋白、β-乳球蛋白和血清白蛋白進行交叉反應(yīng)性實驗結(jié)果均呈陰性，表明兩株細胞分泌的單抗特異性較好。 結(jié)論：以牛乳鐵蛋白為抗原，通過動物免疫、細胞融合、