轉(zhuǎn)鐵蛋白受體單克隆抗體聯(lián)合鹽酸青藤堿抗瘤效應(yīng)研究.pdf

1、目的:
　　轉(zhuǎn)鐵蛋白受體（transferrin receptor，TfR）是一種參與細(xì)胞鐵攝取和生長(zhǎng)調(diào)控的跨膜型糖蛋白。TfR高表達(dá)于多種腫瘤細(xì)胞表面，且其表達(dá)水平與腫瘤的分期及預(yù)后密切相關(guān)。因而，TfR作為腫瘤靶向治療，尤其是腫瘤抗體治療中重要的靶分子而倍受國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)均證實(shí)抗TfR抗體對(duì)多種腫瘤細(xì)胞具有抗瘤效應(yīng)。然而，臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，單獨(dú)應(yīng)用抗TfR抗體治療晚期癌癥患者效果并不理想。本課題在前期研究工作的基

2、礎(chǔ)上，重點(diǎn)探討抗TfR單克隆抗體（TfR mAb）與鹽酸青藤堿單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用時(shí)對(duì)肝癌細(xì)胞系HepG2的體內(nèi)外抗瘤效應(yīng)及其機(jī)制，為進(jìn)一步開展以TfR為靶點(diǎn)的腫瘤化學(xué)免疫療法研究奠定基礎(chǔ)。
　　方法:
　　1．細(xì)胞培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞系HepG2為華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)系保存，于含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中，37℃、95％濕度、5％CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)；
　　2. PI-Annexin-Ⅴ染色檢測(cè)腫瘤細(xì)胞凋亡：

3、PI-Annexin-Ⅴ染色采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)抗TfR mAb與鹽酸青藤堿單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞系HepG2凋亡；
　　3. PI染色檢測(cè)腫瘤細(xì)胞周期：PI染色采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)抗TfR mAb與鹽酸青藤堿單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用后肝癌細(xì)胞系HepG2的周期變化；
　　4. CFSE染色檢測(cè)腫瘤細(xì)胞增殖：CFSE染色采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)鹽酸青藤堿和抗TfR mAbTfR單克隆抗體與鹽酸青藤堿單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用作用后肝癌細(xì)胞系HepG2的

4、增殖；
　　5. Western blot：采用western blot檢測(cè)TfR mAb與鹽酸青藤堿單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用后肝癌細(xì)胞系HepG2的COX-2以及VEGF的表達(dá)；
　　6．通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)探討TfR mAb與鹽酸青藤堿單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用時(shí)對(duì)荷瘤裸鼠腫瘤大小和生存期的影響。
　　結(jié)果:
　　1．TfR mAb抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，并誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生S期阻滯和促進(jìn)凋亡。
　　2．鹽酸青藤堿誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡，抑

5、制腫瘤細(xì)胞的增殖，使細(xì)胞發(fā)生S期阻滯，具有濃度和時(shí)間依耐性。
　　3．TfR mAb與鹽酸青藤堿聯(lián)合應(yīng)用時(shí)對(duì)肝癌細(xì)胞系HepG2的凋亡、增殖和周期具有協(xié)同作用。
　　4．Western blot結(jié)果顯示，肝癌細(xì)胞系HepG2經(jīng)抗TfR mAb單獨(dú)處理后，其COX-2和VEGF的表達(dá)增高，且隨劑量升高而升高。相反，經(jīng)鹽酸青藤堿單獨(dú)處理的細(xì)胞系，其COX-2的表達(dá)隨劑量的升高而降低，且呈劑量依賴性。細(xì)胞系HepG2經(jīng)抗TfR m

6、Ab與鹽酸青藤堿聯(lián)合處理后，其COX-2和VEGF的表達(dá)降低最為顯著。
　　5．體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，TfR mAb與鹽酸青藤堿聯(lián)合應(yīng)用可抑制瘤裸鼠腫瘤的形成和延長(zhǎng)其生存期。
　　結(jié)論:
　　研究證明抗TfR mAb與鹽酸青藤堿單獨(dú)應(yīng)用分別可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞增殖和S期阻滯；首次證明抗TfR mAb與鹽酸青藤堿二者聯(lián)合應(yīng)用對(duì)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞增殖和S期阻滯具有協(xié)同效應(yīng)。其作用機(jī)制可能為二者聯(lián)合作用可