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文檔簡(jiǎn)介
1、目的：通過(guò)制備缺失免疫抑制位點(diǎn)的人早孕因子重組表達(dá)蛋白和合成多肽，生產(chǎn)鑒定抗人早孕因子單克隆抗體。
方法：以pMD18T-HSPE1模板，PCR擴(kuò)增缺失免疫抑制位點(diǎn)的人早孕因子基因片段，經(jīng)限制性內(nèi)切酶BamHⅠ和XhoⅠ雙酶切后，連接到原核表達(dá)載體pGEX-6P-1中，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pGEX6P-EPF11。將表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21，以0.5mmol/L IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)GST-EPF11融合蛋白，Wester
2、n blot鑒定。分別以純化的GST-EPF11融合蛋白和MC29合成多肽為免疫原，免疫Balb/c小鼠，免疫四次，每次免疫間隔時(shí)間為三周，四免后測(cè)定抗體效價(jià)。將小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合，經(jīng)ELISA篩選與克隆化，生產(chǎn)鑒定單克隆抗體。
結(jié)果：構(gòu)建了缺失免疫抑制位點(diǎn)的人早孕因子重組表達(dá)載體pGEX6P-EPF11，用0.5mmol/L IPTG誘導(dǎo)表達(dá)GST-EPF11融合蛋白，破碎表達(dá)菌體，獲取上清，成功獲得純化
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