抗鹽酸克倫特羅單克隆抗體的制備.pdf

1、鹽酸克倫特羅(Clenbuterol，CL)通常被我們稱為“瘦肉精”或者是“營養(yǎng)重分配劑”，它是一種選擇性β-腎上腺受體激動素，可以明顯的提高動物的生長速度，減少動物機體內(nèi)脂肪的合成，經(jīng)常會被不法商販用作飼料添加劑來謀取經(jīng)濟利益。鹽酸克倫特羅進入機體后很容易被吸收，并且在體內(nèi)的半衰期比較長，容易在動物體內(nèi)蓄積殘留，人食用了殘留有鹽酸克倫特羅的肉類產(chǎn)品之后，會導致不同程度的中毒現(xiàn)象，所以該藥物被禁止使用于在食品生產(chǎn)過程中使用。
　　

2、檢測鹽酸克倫特羅在食品中殘留的方法有很多種，包括理化檢測方法，免疫學檢測方法和生物傳感器技術(shù)，其中酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)(ELISA)具有高靈敏度、可定量、操作簡便、成本低等特點，在藥殘檢測中得到了廣泛的應(yīng)用，并得到了迅速的發(fā)展。
　　由于鹽酸克倫特羅的分子量只有313.7，屬于小分子半抗原，只有反應(yīng)原性，而不具備免疫原性，因此本實驗首先利用重氮化方法將鹽酸克倫特羅小分子與大分子載體牛血清蛋白(BSA)和雞卵清白蛋白(OVA)相連，合成

3、了人工抗原CL-BSA和CL-OVA，其偶聯(lián)比分別為27.4∶1和12.0∶1，并且應(yīng)用了SDS-PAGE凝膠電泳和紫外掃描的方法對得到的偶聯(lián)物進行了鑒定，電泳的鑒定結(jié)果顯示了偶聯(lián)物的分子量明顯比載體蛋白的分子量要大，紫外掃面的鑒定結(jié)果顯示了偶聯(lián)物的吸收峰包含了鹽酸克倫特羅和大分子載體蛋白的紫外掃描特征峰，并且在該基礎(chǔ)上出現(xiàn)了一定的偏移;由此可以證明人工抗原偶聯(lián)成功。
　　用人工抗原CL-BSA免疫BALB/c小鼠，免疫完成后，采

4、用間接ELISA的方法測定小鼠多抗血清(pAb)的抗體效價，并且利用了間接競爭ELISA的方法對pAb的敏感性進行了測定。測定結(jié)果顯示，小鼠多抗血清的效價可以達到1∶12800，血清敏感性測定實驗也顯示了小鼠多抗血清產(chǎn)生了針對CL的抗體，計算所得IC50為160ng/mL，由此進一步證實了人工抗原偶聯(lián)成功。
　　挑選血清效價高、敏感性良好的2號BALB/c小鼠來做細胞融合實驗，將小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞NS0在PEG的作用下進行融