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文檔簡介
1、該研究采用一種新的"融合伴侶"(fusion partner):兔骨髓瘤樣細(xì)胞株240E,與免疫了純化的人粘附蛋白Vitronectin的兔脾臟融合,產(chǎn)生兔-兔雜交瘤細(xì)胞,經(jīng)克隆化后篩選獲得33株特異性分泌抗Vitronectin單克隆抗體的兔類雜交瘤細(xì)胞株.并初步鑒定了部分細(xì)胞株的抗體特性.實(shí)驗(yàn)主要內(nèi)容包括:(1)240E細(xì)胞的培養(yǎng)根據(jù)生長曲線的繪制,調(diào)整240E細(xì)胞生長狀況,獲得適合融合的240E細(xì)胞.(2)動物免疫用合適的方法免疫
2、動物,獲得高滴度的多抗血清和高度活化的脾臟細(xì)胞用于融合.(3)細(xì)胞融合及篩選使用PEG介導(dǎo)240E細(xì)胞與免疫的兔脾細(xì)胞融合,獲得HAT抗性的雜交瘤細(xì)胞,經(jīng)ELISA和Western Blot篩選,獲得抗vitronectin的陽性克隆.(4)雜交瘤細(xì)胞的克隆化使用有限稀釋法進(jìn)行克隆化,經(jīng)ELISA和Western blot再次篩選,獲得單克隆.(5)雜交瘤細(xì)胞的初步鑒定包括240E細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞染色體分析、免疫組織化學(xué)鑒定、蛋白交叉反
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