抗Vitronectin兔單克隆抗體的制備與初步鑒定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該研究采用一種新的"融合伴侶"(fusion partner):兔骨髓瘤樣細胞株240E,與免疫了純化的人粘附蛋白Vitronectin的兔脾臟融合,產(chǎn)生兔-兔雜交瘤細胞,經(jīng)克隆化后篩選獲得33株特異性分泌抗Vitronectin單克隆抗體的兔類雜交瘤細胞株.并初步鑒定了部分細胞株的抗體特性.實驗主要內(nèi)容包括:(1)240E細胞的培養(yǎng)根據(jù)生長曲線的繪制,調(diào)整240E細胞生長狀況,獲得適合融合的240E細胞.(2)動物免疫用合適的方法免疫

2、動物,獲得高滴度的多抗血清和高度活化的脾臟細胞用于融合.(3)細胞融合及篩選使用PEG介導(dǎo)240E細胞與免疫的兔脾細胞融合,獲得HAT抗性的雜交瘤細胞,經(jīng)ELISA和Western Blot篩選,獲得抗vitronectin的陽性克隆.(4)雜交瘤細胞的克隆化使用有限稀釋法進行克隆化,經(jīng)ELISA和Western blot再次篩選,獲得單克隆.(5)雜交瘤細胞的初步鑒定包括240E細胞和雜交瘤細胞染色體分析、免疫組織化學鑒定、蛋白交叉反

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