抗ERBB2單克隆抗體的制備與鑒定.pdf

1、ERBB2作為一個(gè)重要的腫瘤表面標(biāo)記蛋白已被國(guó)際公認(rèn)為重要的臨床指標(biāo)。ERBB2的過(guò)表達(dá)與多種腫瘤的發(fā)生有關(guān)，且與治療抗性和不良預(yù)后密切相關(guān)。應(yīng)用特異性單抗檢測(cè)腫瘤組織中ERBB2的過(guò)表達(dá)情況，能夠有效地判斷病人的預(yù)后，幫助選擇合理的治療方案。
　　本課題采用ERBB2融合蛋白免疫Balb/c小鼠，選取抗血清效價(jià)高的小鼠，將其脾細(xì)胞與SP2/0進(jìn)行細(xì)胞融合。以有限稀釋法進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，ELISA篩選陽(yáng)性雜交瘤，最終獲得數(shù)株來(lái)自不同

2、親本、穩(wěn)定分泌特異性ERBB2單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。將這幾株雜交瘤生產(chǎn)腹水抗體并經(jīng)Protein G層析柱親和純化后，對(duì)所得單抗進(jìn)行抗體效價(jià)測(cè)定、抗體亞型鑒定，同時(shí)輔以蛋白質(zhì)印跡、免疫沉淀、細(xì)胞免疫熒光、免疫組化等實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證抗體的特異性、親和力與應(yīng)用范圍;另外，通過(guò)MTT方法篩選出能夠抑制過(guò)表達(dá)ERBB2的乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抗ERBB2單克隆抗體。
　　本次單抗制備獲得若干株純度高、效價(jià)好、特異性強(qiáng)的抗ERBB2單克隆抗體，抗體效

3、價(jià)均在6×105以上。它們均能特異地識(shí)別過(guò)表達(dá)ERBB2蛋白和SK-BR-3、BT474細(xì)胞中的內(nèi)源ERBB2蛋白，為深入研究ERBB2蛋白在不同腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)以及不同細(xì)胞系之間與ERBB2有關(guān)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，和進(jìn)一步闡明抗ERBB2單克隆抗體抑制腫瘤的作用機(jī)制等提供了有力的研究工具。這些單抗均能應(yīng)用于免疫沉淀、免疫熒光、免疫組化等實(shí)驗(yàn)，為研制臨床診斷ELISA試劑盒和免疫組化試劑盒提供了思路，可以幫助判斷乳腺癌病人的預(yù)后以及指導(dǎo)選擇