抗ErbB2全人源單克隆抗體H2-18在乳腺癌中的抗腫瘤作用及其機(jī)理.pdf

1、近年來(lái)乳腺癌已經(jīng)成為女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤。每年乳腺癌的發(fā)病率都在不斷攀升，其中以包括我國(guó)在內(nèi)的發(fā)展中國(guó)家最為迅速。
　　乳腺癌的死亡率一直居高不下，特別是ErbB2過(guò)表達(dá)的乳腺癌患者。ErbB2基因在25％-30％的乳腺癌患者的癌組織中有過(guò)度表達(dá)，此類(lèi)ErbB2過(guò)表達(dá)的乳腺癌生長(zhǎng)速度快、侵襲性強(qiáng)，易發(fā)生早期轉(zhuǎn)移。對(duì)放、化療不敏感，易復(fù)發(fā)。故無(wú)病生存期短，預(yù)后差。
　　Trastuzumab，曲妥珠單克隆抗體，(商品名赫賽汀，

2、Herceptin)，是由羅氏制藥生產(chǎn)的靶向ErbB2受體胞外段結(jié)構(gòu)域Ⅳ區(qū)的人源化IgG1型抗體，已于1998年獲得美國(guó)FDA批準(zhǔn)用于ErbB2高表達(dá)轉(zhuǎn)移性乳腺癌的治療。但臨床數(shù)據(jù)顯示約70％的ErbB2過(guò)表達(dá)的乳腺癌患者對(duì)Trastuzumab治療不產(chǎn)生反應(yīng)，且大部分對(duì)Trastuzumab發(fā)生反應(yīng)的患者也會(huì)在治療開(kāi)始1年內(nèi)產(chǎn)生耐藥。
　　Pertuzumab，帕妥珠單克隆抗體，(商品名Perjeta)，是由羅氏制藥生產(chǎn)的另一株

3、靶向ErbB2受體胞外段結(jié)構(gòu)域Ⅱ區(qū)的人源化單克隆抗體。由于Trastuzumab抑制ErbB2同源二聚體和配體非依賴(lài)的異源二聚體，而Pertuzumab抑制配體依賴(lài)的ErbB2異源二聚體，兩者具有互補(bǔ)的抗腫瘤作用機(jī)理，故其聯(lián)合用藥被FDA批準(zhǔn)為一線治療。盡管臨床試驗(yàn)證實(shí)Trastuzumab和Pertuzumab的聯(lián)合用藥在Trastuzumab耐藥的患者中體現(xiàn)出一定的抗腫瘤活性，但其客觀反應(yīng)率僅為25％，而完全反應(yīng)率低于8％。為了進(jìn)一

4、步提高ErbB2靶向抗體的療效，通過(guò)篩選全人源噬菌體抗體庫(kù)獲得了一株靶向ErbB2受體胞外段結(jié)構(gòu)域Ⅰ區(qū)的全人源單克隆抗體——H2-18，并且驚奇地發(fā)現(xiàn)其能夠強(qiáng)有力地誘導(dǎo)ErbB2過(guò)表達(dá)乳腺癌細(xì)胞發(fā)生程序性細(xì)胞死亡(PCD)。
　　本文將深入研究H2-18在ErbB2過(guò)表達(dá)乳腺癌細(xì)胞，特別是在Trastuzumab耐藥乳腺癌細(xì)胞中的抗腫瘤作用，并分析其作用機(jī)理，尤其是闡述其誘導(dǎo)程序性細(xì)胞死亡的作用機(jī)制。
　　通過(guò)MTS方法檢測(cè)

5、的細(xì)胞活力實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，雖然在Trastuzumab敏感細(xì)胞BT474和SKBR-3中，H2-18的作用效果遜色于Trastuzumab+Pertuzumab聯(lián)用組及Trastuzumab單藥組，但在Trastuzumab耐藥細(xì)胞HCC1954及HCC1419中的作用效果卻是最強(qiáng)的。并且其活力抑制率與其在敏感細(xì)胞中的相似，并未受耐藥機(jī)制影響，暗示H2-18的作用機(jī)制不同于Trastuzumab。
　　流式AnnexinⅤ及PI雙染

6、法結(jié)果顯示在Trastuzumab敏感及耐藥細(xì)胞中，H2-18皆能明顯誘導(dǎo)其死亡，死亡細(xì)胞主要位于右上雙陽(yáng)性區(qū)。而其他抗體組不能產(chǎn)生這種作用。
　　在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，構(gòu)建了Trastuzumab耐藥乳腺癌荷瘤裸鼠模型，通過(guò)對(duì)腫瘤大小及生長(zhǎng)速度的觀察，評(píng)價(jià)出H2-18組較其他抗體組具有明顯優(yōu)勢(shì)。
　　在對(duì)H2-18誘導(dǎo)程序性細(xì)胞死亡的機(jī)制研究中，利用TEM觀察細(xì)胞形態(tài)，發(fā)現(xiàn)其不具有凋亡的特征，卻與壞死更相似。并且這是一種caspa

7、se非依賴(lài)的，Bcl-2家族沒(méi)有參與調(diào)節(jié)的程序性壞死。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，此死亡通路由激活受體相互作用蛋白1(RIP1)而觸發(fā)，導(dǎo)致活性氧簇(ROS)產(chǎn)生增加。升高的ROS激活JNK通路，JNK被磷酸化激活后轉(zhuǎn)位入核，磷酸化其底物c-Jun，活化的c-Jun最后通過(guò)轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)節(jié)實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的程序性死亡。
　　H2-18能夠有效抑制ErbB2過(guò)表達(dá)乳腺癌的生長(zhǎng)，特別是Trastuzumab耐藥乳腺癌的生長(zhǎng);并且因其具有獨(dú)特的PCD誘導(dǎo)活