重組抗TNF-α全人源單克隆抗體在食蟹猴體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、背景:
　　TNF-α是一種具有多種生物學(xué)活性的細(xì)胞因子,通過(guò)與受體結(jié)合,參與抵抗細(xì)菌、病毒和寄生蟲的感染,促進(jìn)組織修復(fù),引起腫瘤細(xì)胞凋亡等。然而亦有諸多研究證實(shí),許多炎性疾病的發(fā)生發(fā)展與TNF-α的過(guò)度表達(dá)密切相關(guān)。TNF-α抑制劑通過(guò)降低炎性疾病中TNF-α的水平,為這些疾病的治療提供了新途徑。TNF-α抑制劑的開發(fā)備受國(guó)內(nèi)外研究者重視。本實(shí)驗(yàn)擬對(duì)TNF-α抑制劑X抗體在食蟹猴體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特征及生物利用度進(jìn)行研究;與此同時(shí)

2、,以阿達(dá)木為參比制劑,系統(tǒng)考察X抗體在食蟹猴體內(nèi)的生物等效性,可為X抗體后續(xù)的臨床研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　目的:
　　利用中國(guó)食品藥品檢定研究院國(guó)家藥物安全評(píng)價(jià)監(jiān)測(cè)中心構(gòu)建并通過(guò)驗(yàn)證的食蟹猴血漿中X抗體和阿達(dá)木抗體含量的ELISA測(cè)定試劑盒,測(cè)定X抗體和阿達(dá)木抗體在食蟹猴單次靜脈給藥后血漿中藥物濃度,研究皮下(sc)給予低、中、高劑量X抗體在食蟹猴體內(nèi)的暴露與濃度關(guān)系,及其藥代動(dòng)力學(xué)特征,為X抗體的后續(xù)臨床試驗(yàn)提供參考依據(jù);

3、比較iv與sc方式給藥X抗體后在體內(nèi)的暴露情況,評(píng)價(jià)X抗體sc給藥方式的生物利用度;通過(guò)比較X抗體和阿達(dá)木抗體在食蟹猴體內(nèi)的動(dòng)力學(xué)特征,進(jìn)而評(píng)價(jià)X抗體和阿達(dá)木抗體的生物等效。
　　方法:
　　1.ELISA試劑盒的建立:系統(tǒng)摸索試劑盒中TNF-α包被濃度及二抗稀釋倍數(shù)最佳試驗(yàn)條件。
　　2.建立X抗體和阿達(dá)木抗體的ELISA檢測(cè)方法。
　　3.通過(guò)ELISA法檢測(cè)X低、中、高濃度食蟹猴皮下給藥后血漿中的濃度,研究

4、X抗體在食蟹猴體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特征。
　　4.通過(guò)比較X抗體皮下給藥與靜脈注射給藥,研究X抗體在食蟹猴體內(nèi)的生物利用度。
　　5.以阿達(dá)木抗體為參比制劑,比較相同濃度X抗體與阿達(dá)木抗體皮下注射后食蟹猴中的血藥濃度,研究X抗體與阿達(dá)木在食蟹猴體內(nèi)的生物等效性。
　　結(jié)果:
　　1. TNF-α的最佳包被濃度為100 ng/孔,二抗的最佳稀釋倍數(shù)為1:40000。
　　2.建立的X抗體及阿達(dá)木抗體ELISA檢測(cè)

5、方法特異性好,靈敏度高,精密度及準(zhǔn)確度均符合試驗(yàn)要求。
　　3. X抗體皮下注射給藥劑量分別為1.0、3.0和10.0 mg/kg時(shí),Cmax分別為26.1±6.4、22.5±4.7和80.6±11.4μg/mL;末端消除相t1/2分別為316.8±238.6、274.8±90.3和387.7±101.6 h;表觀分布容積Vz/F分別為107.7±35.1、143.0±30.3和119.2±23.2 mL/kg;表觀清除率Cl/F

6、分別為0.29±0.14、0.40±0.17和0.22±0.06 mL/h/kg;濃度-時(shí)間曲線下面積(AUC0-168)分別為1136.7±154.1、2813.7±579.0和11300.8±1677.0μg·h/mL。劑量與AUC0-168的比值基本相同,AUC0-168隨著劑量的增大而增大(P<0.05),而t1/2、Vz/F、Cl/F均不隨劑量改變(P>0.05),表明本實(shí)驗(yàn)給藥濃度范圍(1.0-10.0 mg/kg)內(nèi),且在

7、給藥后168 h內(nèi),X單抗在食蟹猴血漿中的暴露呈線性藥代動(dòng)力學(xué)特征(r2=0.9966)。
　　4.中劑量(3.0 mg/kg)X抗體皮下給藥與靜脈給藥后食蟹猴體內(nèi)的AUC分別為2813.70±579.00、3628.40±702.90μg.h/mL,X抗體皮下給藥的生物利用度為77.5％。
　　5.中劑量(3.0 mg/kg)X抗體與3.0 mg/kg阿達(dá)木抗體皮下給藥后食蟹猴體內(nèi)的Cmax分別為22.5±4.7、22.6

8、±4.8μg/mL;AUC0-168h分別為2813.70±579.00、2666.3±453.3μg·h/mL;AUC0-inf分別為8742.6±3964.4、8915.5±3227.0μg·h/mL;Tmax分別為28±23、15±22 h;t1/2分別為274.8±90.3、312.7±144.0 h。對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后Cmax、AUC0-168h、AUC0-inf采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),P分別為0.966、0.708、0.884;Tmax

9、及t1/2采用非參數(shù)檢驗(yàn)法檢驗(yàn),P值均大于0.05,分別為0.211和0.699。均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。置信區(qū)間符合要求。X抗體與阿達(dá)木抗體食蟹猴皮下給藥生物等效。
　　結(jié)論:
　　1.采用ELISA方法,測(cè)定X抗體和阿達(dá)木抗體在食蟹猴單次靜脈給藥后血漿中藥物濃度,用于研究X抗體在食蟹猴體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特征、生物利用度及生物等效性是科學(xué)可行的。
　　2. X抗體皮下給藥在食蟹猴體內(nèi)(給藥范圍1.0-10.0 mg/kg內(nèi))呈