抗人FcεRIα單克隆抗體的制備及初步鑒定.pdf

1、目的：制備鼠抗人的IgE高親和力受體FcεRIα的單克隆抗體并對其進行鑒定,為過敏性疾病的相關研究提供條件。 方法：用IgE高親和力受體FcεRIα重組蛋白作為抗原免疫BALB/C小鼠，常規(guī)方法進行融合，經(jīng)篩選及克隆化建立可穩(wěn)定分泌抗人FcεRIαMcAb的雜交瘤細胞株，用ELISA、流式細胞儀，免疫熒光以及Western－blot方法進行抗體的初步鑒定。競爭結合試驗初步檢測所制備抗體的生物活性。 結果：共制備出2株抗人

2、FcεRIα單克隆抗體雜交瘤細胞株，分別命名為B5B4和B4C2。流式細胞術分析此2株抗體與轉染人FcεRIα的中國倉鼠細胞系CHO3D10細胞的結合率分別為96.2％、97.4％，與表達FcεRI、FcγRII的人嗜堿性粒細胞系KU812E細胞的結合率分別為96.7％、95.4％，免疫熒光顯示2株抗體均能與FcεRIα發(fā)生特異性反應。Western－blot結果顯示抗體輕重鏈分別約28Kd與50Kd。競爭結合試驗檢測顯示所制備出的純化