抗獨特型單克隆抗體制備的研究.pdf

1、嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila，Ah)在自然界分布廣泛，普遍存在于淡水、污水、淤泥、土壤和人類糞便中，對養(yǎng)殖及野生魚、蝦、蛙、甲魚等生物常見的細菌性病原體，可通過受損傷的皮膚及傷口感染上述生物，并可進一步通過食物鏈感染人。此菌所致魚類等嗜水氣單胞菌病具有流行廣、發(fā)病快、死亡率高等特點，常常造成養(yǎng)殖漁業(yè)的巨大經(jīng)濟損失，嚴重危害漁業(yè)及其它水產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。目前國內(nèi)外有關(guān)嗜水氣單胞菌魚病的研究多局限于病原微生物學(xué)方面，對該病

2、的診斷主要依靠病理觀察及細菌學(xué)鑒定，兩種方法在準確性及檢測速度上均有一定限制；防治方面主要利用抗生素或減活、滅活疫苗，安全性和有效性均不理想。鑒于此，本研究設(shè)計制備嗜水氣單胞菌抗獨特型單克隆抗體，為嗜水氣單胞菌病檢測及治療提供新的技術(shù)方法，并為其它魚用疫苗的研制提供參考。具體實驗方法及結(jié)果如下：
　　利用本室自制的具有免疫中和活性的抗嗜水氣單胞菌單克隆抗體1G10，通過動物免疫、細胞融合、篩選和克隆化，獲得4株分泌抗獨特型抗體的雜

3、交瘤細胞株，分別命名為1F9、1H10、3F5和4G3。雜交瘤細胞株的培養(yǎng)上清液及BALB／c小鼠腹水中抗獨特型抗體效價范圍分別為1×10－1～1×10－2和1×10－4～1×10－5。4株雜交瘤細胞系所分泌的IgG亞類是：1F9、1H10、4G3為IgG2b；3F5為IgG3。ELISA競爭抑制實驗結(jié)果顯示：4株抗獨特型抗體與兔抗嗜水氣單胞菌多克隆抗體的結(jié)合都能被嗜水氣單胞菌抑制，而且抑制百分率隨著嗜水氣單胞菌濃度的增加而增加，說明4

4、株嗜水氣單胞菌抗獨特型單克隆抗體與嗜水氣單胞菌之間存在相互競爭關(guān)系，均具有模擬嗜水氣單胞菌抗原的特性。抑制百分率結(jié)果顯示1F9、1H10受抑制程度比其余2株受抑制程度高，推測其模擬嗜水氣單胞菌抗原的活性最好。生物學(xué)功能鑒定結(jié)果表明，制備4株嗜水氣單胞菌抗獨特型單克隆抗體腹水的BALB／c小鼠血清均能與嗜水氣單胞菌反應(yīng)，效價為1:100～1:1000，說明上述小鼠血清中含有抗嗜水氣單胞菌抗體，提示4株嗜水氣單胞菌抗獨特型單克隆抗體均具有模