小細(xì)胞肺癌抗獨(dú)特型疫苗的制備及功能研究.pdf_第1頁
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1、復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文小細(xì)胞肺癌抗獨(dú)特型疫苗的制備及功能研究姓名：李勇申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：腫瘤免疫學(xué)指導(dǎo)教師：趙新泰姚明20050507復(fù)旦火學(xué)碩士研究生學(xué)位論文ExperimentalinductionofimmunitybyantiidiotypicantibodiesagainstsmallcelllungcancerAbstractobjective：AccordingtOtheimmunenetworktheory，anti

2、—idiotypicantibody(Ab2)canmimictheprimaryantigentoinducethecorrespondingimmunnityOnthebaseofanti—idiotypicmonoclonalantibody(mAb)3F6ofmAb2F7(Ab1)againstaspecificantigenonsmallcelllungcancer(SCLC)，3F6single—chainvariablef

3、ragment(3F6ScFv)wastobeconstructedinordertoreducetheheterogenicantigenicityTheabilityof3F6and3F6ScFvtoinducehumoralandcellularimmuneresponseagainstsmallcelllungcancerwastobeinvestigatedMethods：AftertotalRNAwasisolatedfro

4、m3F6hybridomacells，theDNAfragmentsencodingtheVHandVLdomainsof3F6wereamplifiedbyRT—PCRusingtheuniversalprimersofantibodyvariableregionsForlinkingofthetwovariableregions，the15aminoacidlinker(Gly4Ser)3，wasusedThentheVH—link

5、erVLfragmentwassubclonedintotheexpressionvectorpQE31，and3F6ScFvwasinducedtoexpressbyIPTGinM15bacteriaTheexpressed3F6ScFvwaspurifiedandrefoldedWhereafter3F6and3F6ScFvwereusedtOimmunizeBALB／cmicerespecdvelyUsingELISAandWes

6、ternBlottodetecttheinteractionofimmunizedsera(Ab3)andthesmallcelllungcancerspecificantigen，TheantibodybindinginhibitionassayswereperformedbycompetitiveWesternblotCellularimmunityagainsttheantigenspecifictoSCLCinducedby3F

7、6and3F6ScFvwastestedbythedelayed—typehypersensitivityresponseandmouselymphocyteproliferationassayResults：Theexpressionplasmidof3F6ScFvwassuccessfullycontructed，and3F6ScFvwasalsoexpressed，purifiedandrefoldedsuccessfullyTh

8、esera(Ab3)immunizedwith3F6and3F6ScFvwereshownsignificantreaction(PO001，ascomparedtocontrolsera)withSCLCspecificantigenonNCI—H128cellsandspecificallycompetedthebindingof2F7tothespecificantigenLymphocyteproliferationreacti

9、onsofboth3F6and3F6ScFvimmunizedgroupsweresignificanthigher(P005)thanthatofnegadvecontrolgroupsDTHresponseschallengedwithNCIH128cellswerealsosignificant(P0001)spongerinmiceimmunizedwith3F6and3F6ScFvascomparedtOthemiceimmu

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