B細(xì)胞淋巴瘤獨(dú)特型DNA疫苗誘導(dǎo)特異性免疫反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、該研究選用來(lái)源于人B細(xì)胞淋巴瘤臨床活檢標(biāo)本和人B細(xì)胞淋巴瘤Namalwa細(xì)胞系的獨(dú)特型抗原的免疫原性,該研究克隆小鼠趨化因子MCP-3作為免疫佐劑分子,分別與scFv、VH、CDR3三種獨(dú)特型抗原基因融合構(gòu)建DNA疫苗.在前人基礎(chǔ)上,我們所構(gòu)建的MCP-CDR3和MCP-VH均為新的疫苗方案,探討這兩種獨(dú)特型DNA疫苗在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)特異性抗獨(dú)特型免疫瓜的效果有無(wú)差異,并且比較三種疫苗在構(gòu)建和制備方面的優(yōu)缺點(diǎn).這對(duì)于獨(dú)特型DNA疫苗治療B

2、細(xì)胞淋巴瘤的臨床應(yīng)用是必須的.該研究首先通過(guò)RT-PCR方法擴(kuò)增人B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系Namalwa免疫球蛋白重鏈可變區(qū)和臨床活檢組織細(xì)胞免疫球蛋白重鏈和輕鏈可變區(qū)序列.將活檢組織細(xì)胞的VH和VL用不著15aa的連接片段組裝為scFv片段.通過(guò)DNA比對(duì)分析,確定Namalwa免疫球蛋白重鏈可變區(qū)中互補(bǔ)決定區(qū)3(CDR3)序列,以PCR的方法對(duì)所確定的CDR3序列進(jìn)行修飾以利于重組PCR.MCP-3完整cDNA同樣修飾后與CDR3序列中間

3、以8aa的連接片段通過(guò)重組PCR的方法融合在一起作為抗原基因片段,構(gòu)建DNA疫苗.以同樣的策略構(gòu)建分別含有MCP3-NVH、MCP3-scFv融合基因的DNA疫苗.綜上所述,我們成功構(gòu)建了3種來(lái)源于人B細(xì)胞淋巴瘤腫瘤細(xì)胞的DNA疫苗,分別是pcDNA3.1/MCP-CDR3、pcDNA3.1/MCP-NVH、pcDNA3.1/MCP-scFv質(zhì)粒.用其免疫動(dòng)物后可誘導(dǎo)出特異性抗腫瘤細(xì)胞的免疫反應(yīng),證明以CDR3為特異性抗原基因的DNA疫