GBS相關(guān)空腸彎曲菌脂多糖抗體及其抗獨(dú)特型抗體的研究.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文GBS相關(guān)空腸彎曲菌脂多糖抗體及其抗獨(dú)特型抗體的研究姓名：趙哲申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：郭力李春巖20040301中文摘要就提供了一種不用cj菌檢測(cè)Cj相關(guān)GBS新檢測(cè)方法。在組織學(xué)中可以用Aid檢測(cè)抗體Id的存在及定位。還可用來清除體內(nèi)的LPS抗體，或在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中做干預(yù)。方法：厭氧培養(yǎng)Pennor0：19型空腸彎曲菌，酚一水法提取LPS，DNase，RNase，ProteinaseK消化混合物中

2、的DNA，RNA及蛋白質(zhì)。銀染和考馬斯亮藍(lán)染色鑒定所提LPS純度。LPS用包被稀釋液稀釋致10ug／ml，包被酶標(biāo)板，2％牛血清白蛋白封閉，檢測(cè)5位GBS患者血漿LPS抗體，選取LPS抗體陽(yáng)性血漿。將Sepharose4FastFlow介質(zhì)裝入柱中，用冰lmMHCl溶脹，少量，多次入柱，最后一次把HCl徹底放干凈，防止殘留的HCl影響下一部偶聯(lián)過程的PH值。預(yù)先將LPS溶于偶聯(lián)緩沖液中，立即將LFS溶液加入柱中，不斷上下顛倒晃動(dòng)，室溫2

3、～4h。Tris緩沖液多次少量入柱，以封閉介質(zhì)中未被偶聯(lián)的活性基團(tuán)，室溫2h。TrisHCl緩沖液和乙酸緩沖液反復(fù)交替入柱，以洗去結(jié)合不牢固的LPS。GBS患者(ELISA檢測(cè)LFS抗體陽(yáng)性)血漿用022urn濾膜過濾，以除去顆粒性物質(zhì)，防止堵塞介質(zhì)的孔徑。血漿入柱，為保證抗原抗體反應(yīng)充分，保持緩慢流出。血漿過完后用PB緩沖液沖柱。這時(shí)血漿中的抗體被偶聯(lián)在介質(zhì)上的LPS所吸附。緩慢加入3MKSCN以解離吸附的抗體，收集解離液，每Iml收