赭曲霉素A單克隆抗體的制備及其初步應用.pdf

1、赭曲霉毒素（Ochratoxin）是一類有毒的微生物代謝產物，由曲霉屬真菌和青霉屬真菌代謝產生，其中毒性比較強的是赭曲霉毒素A(OchratoxinA，OTA)，尤其對腎臟能造成很強的損傷，臨床上被認為是一種主要的腎毒素。由于在一些農產品中經常發(fā)生赭曲霉毒素中毒事件，近年來，赭曲霉毒素及其檢測研究越來越受到人們的重視。
　　 本研究旨在通過制備赭曲霉毒素A單克隆抗體，并對此進行初步鑒定，為今后檢測食品中OTA的殘留提供實驗基礎。

2、
　　 方法:1、將OTA與牛血清白蛋白(BSA)的偶聯產物（購自sigma公司）用10 mM磷酸鹽緩沖液(PBS)稀釋成1ug/ul備用。采用碳二亞胺法將OTA偶聯到血藍蛋白（KLH），紫外吸收和ELISA測定偶聯產物以確定是否偶聯成功。
　　 2、采用小劑量長周期的免疫方案，OTA-BSA偶聯產物免疫雌性B ABL/c小鼠，分別以BSA、OTA-KLH作為包被抗原，酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測小鼠血清中抗體的效

3、價，選取效價最高的小鼠取脾細胞和骨髓瘤細胞SP2/0融合，以OTA-KLH作為包被抗原，以BSA作對照，ELISA檢測雜交瘤細胞上清中的抗體，獲得分泌抗OTA的雜交瘤細胞株，有限稀釋法對分泌抗OTA雜交瘤細胞進行克隆化，ELISA確定抗體的特異性，并獲得單克隆細胞株。腹水誘生法大量制備抗OTA的單克隆抗體，并以ELISA檢測腹水效價，同時以BSA、KLH作包被抗原對照，觀察有無交叉反應。
　　 結果:小鼠骨髓瘤細胞(SP2/O)

4、與小鼠脾細胞細胞融合后，ELISA篩選抗體分泌陽性且與BSA反應呈陰性的雜交瘤細胞株，對分泌抗OTA特異性抗體的雜交瘤細胞進行4輪克隆化，抗體陽性率達到了100％，建立了2株能穩(wěn)定分泌抗OTA抗體的單克隆雜交瘤細胞株，命名為2D8和3G11。腹水誘生法制備了大量的單克隆抗體，腹水抗體效價分別為:1∶102400和1∶51200，而且與BSA和KLH無交叉反應。通過間接競爭酶聯免疫吸附法的評價，2D8檢測下限為0.16 ng/ml，半抑制