黃曲霉毒素B-,1-單克隆抗體的制備及應(yīng)用.pdf

1、隨著世界經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人類(lèi)生活水平的提高，人們?cè)谠絹?lái)越多地關(guān)注食品對(duì)人的生命安全和身體健康的影響。在食品的污染因素中，真菌毒素對(duì)食品的污染是最嚴(yán)重的污染之一，而黃曲霉毒素因其對(duì)人、畜肝臟的劇烈損害而名列毒性之首。黃曲霉毒素(AFT)是一組真菌的次級(jí)代謝毒性產(chǎn)物。在天然污染的食品和飼料中以黃曲霉毒素B1(AFB1)最為常見(jiàn)，是黃曲霉菌產(chǎn)生毒素中的主要成分，其毒性和致癌性也最強(qiáng)，不僅給社會(huì)帶來(lái)重大的經(jīng)濟(jì)損失，而且嚴(yán)重威脅消費(fèi)者的健康。世界各國(guó)

2、均制定了嚴(yán)格的AFT限量標(biāo)準(zhǔn)，且限量要求日益嚴(yán)格。我國(guó)目前還沒(méi)有自主研制、適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)的AFT檢測(cè)試劑盒和免疫親和柱，只有少數(shù)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督部門(mén)等機(jī)構(gòu)使用極其昂貴的國(guó)外進(jìn)口產(chǎn)品進(jìn)行AFT抽樣檢測(cè)，根本無(wú)法有效地對(duì)食品、飼料生產(chǎn)的各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行監(jiān)控，造成AFT污染十分嚴(yán)重。為了解決該現(xiàn)狀，迫切需要尋找一種經(jīng)濟(jì)、快捷、準(zhǔn)確并且易于普及推廣的AFT檢測(cè)方法，進(jìn)而能夠有效地對(duì)食品的生產(chǎn)、運(yùn)輸、儲(chǔ)存和銷(xiāo)售進(jìn)行監(jiān)控，保障廣大消費(fèi)者的健康。 本研

3、究采用雜交瘤技術(shù)，以黃曲霉毒素B1(AFB1)—牛血清白蛋白(BSA)復(fù)合物為免疫原免疫BALB/C小鼠，制備了4株穩(wěn)定產(chǎn)生抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，分別命名為1D4，2A12，3B3，4A12，對(duì)其中的2A12細(xì)胞株分泌的抗體(以下簡(jiǎn)稱(chēng)2A12單抗)進(jìn)行了綜合鑒定。2A12單抗屬I(mǎi)gG1，腹水效價(jià)1：5×105，親和常數(shù)1.67×1010L/mol。黃曲霉毒素類(lèi)似物B1，B2，G1，G2，M1與2A12單抗的相對(duì)交叉反

4、應(yīng)率分別為100％，52.5％，28.3％，20.0％，29.1％。表明該細(xì)胞株具廣譜性，這一特點(diǎn)有利于作AFT總量的測(cè)定。 2A12單抗應(yīng)用于三種黃曲霉毒素檢測(cè)方法：1、免疫吸附法(ELISA)：檢測(cè)限為0.5ug/kg，檢測(cè)范圍0.5～50ug/kg。ELISA是常規(guī)檢測(cè)方法，通量較高，但不宜野外現(xiàn)場(chǎng)測(cè)定。 2、免疫親和層析—熒光光度計(jì)法(IAC-SFB)：檢測(cè)限低于1ug/kg，測(cè)量范圍1～300ug/kg。IAC

5、-SFB以免疫親和柱高效凈化樣品，真菌毒素?zé)晒夤舛扔?jì)直接報(bào)告測(cè)定結(jié)果，速度快，操作簡(jiǎn)易、安全，且可發(fā)展為野外現(xiàn)場(chǎng)測(cè)定技術(shù)。 3、免疫親和層析—高效液相色譜法(IAC-HPLC)：檢測(cè)限低于1ug/kg，測(cè)量范圍1～300ug/kg。IAC-HPLC法同樣以免疫親和柱高效純化(凈化)樣品，高效液相色譜儀檢測(cè)分析。此方法既可對(duì)AFT各亞類(lèi)單獨(dú)定量，亦可進(jìn)行AFT總量測(cè)定，常用于確證分析。 以上三種方法的回收率均在70％以上，