抗B型肉毒毒素Hc結構域單克隆抗體的制備及中和B型肉毒毒素單克隆抗體的篩選.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、西南大學碩士學位論文抗B型肉毒毒素Hc結構域單克隆抗體的制備及中和B型肉毒毒素單克隆抗體的篩選姓名：陳榮昌申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：唐云明王慧20090501兩南大學學何淪文摘唼隆到pcDNA31／mychis上，然后將質粒pcDNA31／mychissytll轉染PCI2細胞。加G418篩選，篩選單克隆細胞株。提取單克隆細胞株的總RNA，PCR簽定sytII基因的轉錄。Westemblot鑒定表明篩選到的P

2、CI2細胞系能表達sytII。用FITC標記的標記BHc然后與篩選到的穩(wěn)定表達sytII的PCI2細胞系孵育，熒光顯微鏡分析表明細胞被標記上了熒光，說明篩選得到的PCI2細胞系可以作為單克隆抗體阻斷實驗的模型，將此Pcl2細胞系稱為PCI2sytII。細胞流式結果表明得到的三株單克隆抗體能阻斷BHc與PCI2sytII的結合。單克隆抗體的識別位點的實驗表明，Al、A2識別相I司的表位，而Bl與A1、A2識別的位點是不一樣的。單一抗體中和

3、實驗表明，篩選得到的單克隆抗體能顯著延長小鼠的死亡時間，但并不能完全保護小鼠。而組合抗體的中和實驗表明無論是A1與B1組合，還是A2與Bl都能比單株單克隆抗體顯著延長小鼠的死產時間。說明本研究制備得到的單克隆抗體有一定的中和活性。ELISA檢測顯示篩選到的單克隆抗體能特異識別BoNT／B毒素。木研究篩選到了能Ifl和BoNT／B的單克隆抗體，這三株抗體能特異的識別BoNT／B，并且能一定程度上保護小鼠免受BoNT／B的傷害，為肉毒毒素的

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