伏馬毒素單克隆抗體的制備及應(yīng)用.pdf

1、伏馬毒素是一種毒性較強(qiáng)的真菌毒素，主要污染玉米、小麥、大米等谷類作物，且污染范圍廣泛。存在于食物和飼料中FB1會(huì)對人體和動(dòng)物的健康造成危害。所以，開發(fā)一種靈敏可靠的實(shí)時(shí)監(jiān)控方法顯得尤為重要。本文旨在研究制備FB1的單克隆抗體，對谷物中FB1的免疫快速檢測方法進(jìn)行研究，從而為谷物中伏馬毒素的監(jiān)控提供基礎(chǔ)。
　　基于“抗體傾向于識別距離耦聯(lián)端最遠(yuǎn)的基團(tuán)”這一免疫學(xué)基本原理，項(xiàng)目對FB1本可以進(jìn)行改造，成功制備了免疫原FB1-GA-BS

2、A和FB1-GA-KLH及包被原FB1-GA-OVA。并通過動(dòng)物免疫及單克隆技術(shù)，獲得了一株能產(chǎn)生高靈敏度、高親和性的單克隆細(xì)胞株，并獲得了高質(zhì)量抗體。研究共獲得3株效價(jià)較高的抗體2D7、4F5和2B9，三株抗體的濃度分別為4.57 mg/mL、3.97 mg/mL和5.64 mg/mL，半數(shù)抑制濃度IC50分別為2.2 mg/mL、6.3 mg/mL和4.2 mg/mL。對三株抗體的交叉反應(yīng)性進(jìn)行研究，其中2D7和4F5對FB2有交叉

3、反應(yīng)，2D7對FB2的親和力更強(qiáng)，交叉反應(yīng)率高達(dá)154％；2B9對FB1特異性較強(qiáng)，對FB2和其他幾種毒素均無交叉反應(yīng)。
　　基于單克隆抗體2B9對FB1的高特異性識別能力，本研究成功構(gòu)建了大米中FB1高特異性間接競爭ELISA檢測方法，該方法可可以排除FB2污染對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾，用于大米中FB1的定性定量分析。方法的檢測限為0.0339 ng/g，與目前常規(guī)的確證方法UPLC-MS/MS方法進(jìn)行相關(guān)性分析，相關(guān)系數(shù)R為0.91。