抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體的制備及其性質(zhì)的鑒定.pdf

1、黃曲霉毒素（Aflatoxin，AFT）主要是由黃曲霉（Aspergillus flavus）和寄生曲霉（Aspergillus parasiticus）產(chǎn)生的毒性極強(qiáng)的次生代謝產(chǎn)物，黃曲霉毒素是一類結(jié)構(gòu)類似的化合物的總稱。在黃曲霉毒素家族中，常見(jiàn)的有黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1和M2等。早在1988年黃曲霉毒素B1被國(guó)際腫瘤研究機(jī)構(gòu)（IARC）定為一級(jí)致癌物。傳統(tǒng)的檢測(cè)方法不但耗時(shí)耗力，成本偏高，而且還需要專業(yè)技術(shù)人員對(duì)分析

2、儀器進(jìn)行操作。采用免疫化學(xué)分析法進(jìn)行檢測(cè)則可以克服以上缺點(diǎn)。本文旨在篩選出能分泌抗AFB1的高親和力的單克隆抗體細(xì)胞株，為建立免疫化學(xué)檢測(cè)方法打下基礎(chǔ)。
　　首先用碳二亞胺法（EDC）構(gòu)建了兩種完全抗原AFB1-BSA和AFB1-OVA，其中AFB1-BSA作為免疫原免疫兩只8周齡BALB/C雌性小鼠四次，AFB1-OVA作為包被原包被酶標(biāo)板，iELISA法測(cè)定免疫小鼠血清效價(jià)。加強(qiáng)免疫后，兩只小鼠的效價(jià)分別達(dá)到了128000和3

3、2000。采用PEG（4000）法將SP2/0骨髓瘤細(xì)胞和免疫小鼠脾臟細(xì)胞進(jìn)行融合，HAT篩選培養(yǎng)基篩選培養(yǎng)，經(jīng)過(guò)3~4輪篩選得到三株能穩(wěn)定分泌抗AFB1單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株：1B7、5A8、5B8。其中，1B7和5A8細(xì)胞株分泌的單克隆抗體為IgM亞型，5B8細(xì)胞株分泌的抗體為IgG1亞型。為便于后期純化，本次實(shí)驗(yàn)采用5B8細(xì)胞株進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。經(jīng)測(cè)定，5B8細(xì)胞株分泌的單克隆抗體效價(jià)達(dá)到20,0000，親和力為7.96×108。將