黃曲霉毒素B1快速檢測方法的建立及初步應用.pdf

1、黃曲霉毒素B1(AFB1)是由黃曲霉菌和寄生曲霉菌產(chǎn)生的劇毒代謝產(chǎn)物，能夠致癌。黃曲霉毒素污染是食品安全領域的熱點問題之一。產(chǎn)生黃曲霉毒素的黃曲霉菌和寄生曲霉菌廣泛存在于玉米、小麥及稻米等農(nóng)作物中，各國對黃曲霉毒素的污染限量標準均有嚴格的規(guī)定。因歐盟的限量標準嚴于我國衛(wèi)生部制定標準，我國出口農(nóng)產(chǎn)品多次因黃曲霉毒素超標遭拒。因此，建立AFB1的快速檢測技術對于保障食品安全，提升我國農(nóng)產(chǎn)品的出口具有重要意義。
　　本研究的目的是:1）

2、建立基于納米金標記單克隆抗體的AFB1直接競爭ELISA檢測技術;2）研制AFB1膠體金免疫層析試紙條。
　　1、利用碳二亞胺法，制備了AFB1偶聯(lián)抗原AFB1-BSA和AFB1-OVA，經(jīng)ELISA和免疫印跡鑒定，偶聯(lián)抗原制備成功，可應用于AFB1相關免疫學檢測方法的建立。
　　2、基于AFB1單克隆抗體(Anti AFB1)，分別建立了常規(guī)間接競爭ELISA(ic-ELISA)、辣根過氧化物酶（HRP）標記Anti AF

3、B1直接競爭ELISA(dc-ELISA)和基于納米金標記的Anti AFB1-HRP直接競爭ELISA(nano-dc-ELISA)三種檢測模式。常規(guī)ic-ELISA的半數(shù)抑制率(IC50)為0.41ng/mL，檢出限(IC10)為0.12ng/mL;dc-ELISA半數(shù)抑制率為0.119ng/mL，IC10為0.037ng/mL;基于納米金和HRP雙標記抗體的dc-ELISA IC50為0.099ng/mL，IC10為0.017ng

4、/mL。
　　3、nano-dc-ELISA具有檢時間短、靈敏度高、檢測下限低的優(yōu)點，在玉米和面粉中平均加標回收率在87％-104％之間，變異系數(shù)均小于10％。對于實際樣品的定量檢測結果與高效液相色譜有相關性較好(R2=0.749)，能夠用于實際樣本中AFB1的快速準確定量。
　　4、建立了AFB1膠體金免疫層析試紙條，檢測靈敏度可達到0.1ng/mL，特異性、重復性良好。對加標樣品中AFB1的檢測限為5μg/kg，通過對谷