黃曲霉毒素B1免疫親和柱的制備及初步應用.pdf

1、黃曲霉毒素屬于真菌毒素，是由曲霉屬中的寄生曲霉和黃曲霉產生的一類結構相似的次級代謝產物，糧食和食品中的主要存在形式是黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1及M2，其中黃曲霉毒素B1(AFB1)的毒性和致癌性最強，可以引起人類的慢性中毒，損害機體的多個臟器，生殖紊亂和免疫抑制等，特別是肝臟損害以及肝癌。很多國家都為本國的食品、飼料等制定了AFB1的限量標準。因此，簡便高效的樣品凈化前處理方法和靈敏特異的檢測技術對維護食品安全具有重要意義。

2、
　　免疫親和柱法作為一種樣品富集和凈化的前處理方法，因其高特異性、高靈敏度及凈化效果好等優(yōu)勢，逐步用于真菌毒素凈化和富集。與儀器分析法相比，酶聯免疫吸附法(ELISA)具有特異性高、重復性較好、操作簡單、成本較低等優(yōu)點。將ELISA與免疫親和柱純化和富集方法相結合，可以提高檢測靈敏度。本研究的目的是:(1)建立AFB1的免疫親和層析柱;(2)優(yōu)化該親和層析柱的使用條件;(3)與ELISA方法相結合的檢測飼料樣品中AFB1的適用性

3、。
　　研究結果表明:(1)用高純度的AFB1單克隆抗體和溴化氰活化的Sepharose4B進行偶聯、裝柱，偶聯率為98％，柱容量為646ng。(2)免疫親和柱可以多次使用，但是免疫親和柱的富集效果會有所下降:7次重復使用后可從85％下降到73％。故優(yōu)化柱子的再生方法，分別用高pH與低pH的緩沖液交替洗滌，經過再生后的柱子對AFB1的富集率可高達93.7％。(4)食品或飼料樣品需用pH中性、低濃度有機溶劑或鹽溶液進行萃取，強有機溶

4、劑或強酸或強堿會影響抗體活性，進而降低富集效率和親和柱的使用次數。(5) AFB1單克隆抗體免疫親和柱的富集條件:上樣緩沖液流速為3ml/min，緩沖液中甲醇濃度為40％;洗脫液含30％甲醇-1M NaCl(pH=2.1)，150ng標準品對應8ml洗脫液體積。經加標回收率實驗計算得到平均回收率為88.1％，變異系數0.62～2.37％。(6)免疫親和柱在4℃放置70天的樣品回收效率為80％。(7)用HPLC方法和免疫親和-ELISA聯