黃曲霉毒素B-,1-快速檢測(cè)試劑盒的研制.pdf

1、黃曲霉毒素B<,1>具有很強(qiáng)的毒性，1988年被國(guó)際癌癥機(jī)構(gòu)列為A類致癌物質(zhì)。黃曲霉毒素會(huì)降低動(dòng)物的產(chǎn)奶產(chǎn)蛋量，危害人類的健康，對(duì)經(jīng)濟(jì)也造成一定的影響。為了對(duì)黃曲霉毒素進(jìn)行有效監(jiān)控，必須有靈敏、特異、快速、可靠、容易普及的方法進(jìn)行檢測(cè)。本項(xiàng)研究應(yīng)用雜交瘤技術(shù)制備抗黃曲霉毒素B<,1>的單克隆抗體，為建立ELISA方法檢測(cè)AFTBl奠定基礎(chǔ)。 本研究改進(jìn)江湖等人報(bào)道的EDC法制備了檢測(cè)抗原AFTB<,1>-OVA。接下來(lái)實(shí)施免疫方

2、案，初次免疫為AFTB<,1>-BSA結(jié)合完全弗氏佐劑，足墊免疫，間隔四周后結(jié)合不完全弗氏佐劑加強(qiáng)免疫小鼠，最后一次免疫后三周通過(guò)尾靜脈或腹腔沖擊免疫小鼠，三到四天后取脾進(jìn)行細(xì)胞融合。 在免疫方案實(shí)施的同時(shí)，確立檢測(cè)方法，以棋盤滴定試驗(yàn)確定抗原1:100包被，免疫鼠血清1:5000稀釋作為陽(yáng)性對(duì)照 (PC)，正常鼠血清1:100稀釋作為陰性對(duì)照(NC)，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記羊抗鼠IgG1:400稀釋。 利用雜交瘤技術(shù)將免疫

3、Babl/c小鼠得到的脾細(xì)胞與SP2/0小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合，間接ELISA方法篩選陽(yáng)性細(xì)胞株。經(jīng)過(guò)八次融合，多次篩選，都得不到穩(wěn)定的陽(yáng)性細(xì)胞株，故而進(jìn)行了多克隆抗體的制備。 通過(guò)免疫家兔，獲得陽(yáng)性血清，以正辛酸-硫酸銨沉淀方法純化血清，用免疫印跡實(shí)驗(yàn)證明了該血清是抗黃曲霉毒素B<,1>的多抗，間接ELISA法測(cè)得純化后的多抗效價(jià)為2.56×10<'5>，間接性競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)得該抗體對(duì)黃曲霉毒素B<,1>的最低檢出濃度為0.051μg/