黃曲霉毒素B-,1-高靈敏度檢測(cè)技術(shù)研究.pdf

1、黃曲霉毒素B<,1>(Aflatoxin B<,1>,AFB<,1>)危害極大,廣泛存在于各種農(nóng)產(chǎn)品、食品和飼料中,嚴(yán)重威脅人類和動(dòng)物的生命安全.世界各國設(shè)置極其嚴(yán)格的限量標(biāo)準(zhǔn),造成技術(shù)性貿(mào)易壁壘。因此，研究建立高靈敏度的AFB<,1>檢測(cè)技術(shù),對(duì)實(shí)施從農(nóng)田到餐桌的農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量控制管理措施,破解技術(shù)壁壘,及時(shí)發(fā)現(xiàn)利剔出受AFBI污染的產(chǎn)品,防止AFB<,1>含量超標(biāo)的產(chǎn)品進(jìn)入食物鏈具有重要意義. 本文根據(jù)AFB<,1>的熒光特性,

2、研究提高AFB<,1>檢測(cè)靈敏度的方法:采用激光光源進(jìn)行激光誘導(dǎo)熒光,建立高靈敏度LIF-HPCE AFB<,1>檢測(cè)技術(shù):提出AFB<,1>配合物的熒光增強(qiáng)效應(yīng),研究新型HgCl<,2>熒光增強(qiáng)劑:建立高靈敏度HPLC柱后HgCl<,2>衍生AFB<,1>檢測(cè)技術(shù);應(yīng)用HgCl<,2>的熒光增強(qiáng)效應(yīng),建立了AFB<,1>免疫親和柱凈化-熒光快速定量檢測(cè)技術(shù). 1.采用375nm小功率(20mW)半導(dǎo)體泵浦固體激光器作為新型的激

3、發(fā)光源,與HPCE耦合,搭建了AFB<,1>高靈敏度檢測(cè)平臺(tái),以MECC分離模式對(duì)AFB<,1>檢測(cè),大大提高靈敏度.緩沖溶液:50mmol/L NaDC,6mmol/L,Na<,2>B<,4>O<,7<,10mmol/L,Na<,2>HPO<,4>,10﹪乙腈:λex=375nm,λem=440nm,操作電壓15kV,電流104μA,毛細(xì)管柱直徑75μm,柱長度57 cm,到檢測(cè)窗口距離50cm.方法精密度RSD<3﹪,重復(fù)性RSD<

4、5﹪,回收率為84.1﹪-96.1﹪,R<'2>=0.9988.最低檢出質(zhì)量0.17pg,最低定量限0.56pg,絕對(duì)檢出量的靈敏度提高了3個(gè)數(shù)量級(jí),顯著高于其他方法. 2.通過研究AFB<,1>與多種金屬離子熒光體系熒光值變化情況,確定HgCl<,2>是一種新型的.AFB<,1>熒光增強(qiáng)劑.室溫下Hg(Ⅱ)與AFB<,1>混勻,反應(yīng)摩爾比大于1:1時(shí),熒光增強(qiáng)反應(yīng)體系2min內(nèi)快速、穩(wěn)定達(dá)到平衡,完成最大增強(qiáng).比傳統(tǒng)的熒光增強(qiáng)

5、劑Br<,2>水增強(qiáng)程度高2倍以上,大大提高了AFB<,1>的檢測(cè)靈敏度:驗(yàn)證了Hg(Ⅱ)離子與AFB<,1>形成配合物熒光增強(qiáng)效應(yīng),發(fā)生AFB<,1>到Hg(Ⅱ)的LMCT躍遷,通過光氧化還原反應(yīng),形成穩(wěn)定的配合產(chǎn)物,使反應(yīng)物體系中剛性結(jié)構(gòu)加強(qiáng),共軛體系增加,熒光效率提高,熒光值大大增強(qiáng). 3.采用HgCl<,2>對(duì)AFT特別是AFB<,1>、AFG<,1>、AFM<,1>進(jìn)行柱后衍生,建立高靈敏度HPLC柱后HgCl<,2>

6、衍生檢測(cè)技術(shù).流動(dòng)相為甲醇-乙腈-水(22:18:60 v:v:v),熒光檢測(cè)器檢測(cè)(λex=365nm,λem=440nm),柱溫30℃,流動(dòng)相流速0.8mL/min;柱斤衍生試劑流速0.4mL/min,進(jìn)樣量10μL,可以在13min內(nèi)同時(shí)分離檢測(cè)五種主要的AFT(B<,1>,B<,2>,G<,1>,G<,2>和M<,1>).AFB<,1>的最低檢出限和最低定量限分別達(dá)到了0.05μg/kg和0.17μg/kg,最低檢出質(zhì)量為0.5

7、pg,絕對(duì)檢出量的靈敏度提高超過了2個(gè)數(shù)量級(jí).重復(fù)性RSD為1.81﹪,低于5﹪;精密度RSD為4.28﹪,在5﹪以下;同收率為84.67-91.10﹪,RSD<5﹪.方法成功分析污染花生,花生醬,花生油,大米,玉米等農(nóng)產(chǎn)品中的黃曲霉毒素,是檢測(cè)農(nóng)產(chǎn)品和食品中黃曲霉毒素可靠有效的方法. 4.將HgCl<,2>熒光增強(qiáng)效應(yīng)引入AFB<,1>免疫親幣¨快速測(cè)定技術(shù)中,建立了一套快速、準(zhǔn)確、簡易的IAC前處理技術(shù),川丁農(nóng)產(chǎn)品及食品中A