黃曲霉毒素B-,1-免疫檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品替代研究.pdf

1、黃曲霉毒素(Aflatoxin)主要是由寄生曲霉(Aspergillusparasiticus)和產(chǎn)毒的黃曲霉(A.flavus)污染糧油及其制品、飼料所產(chǎn)生的有毒次生代謝產(chǎn)物。黃曲霉毒素中比例最大、毒性最強(qiáng)的是黃曲霉毒素B1(AflatoxinB1，AFB1)，具有較強(qiáng)的急慢性毒性，國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)(IARC)將AFB1列為Ⅰ級(jí)致癌物。由于AFB1污染食品的途徑很多，因此要完全杜絕AFB1的污染是不可能的，控制黃曲霉毒素對(duì)人類健康危害

2、的最好方法是加強(qiáng)檢測(cè)和監(jiān)督控制。應(yīng)用抗AFB1單克隆抗體的免疫分析檢測(cè)方法測(cè)定食品中的AFB1得到推廣應(yīng)用。但在進(jìn)行AFB1檢測(cè)過程中有一個(gè)共同的不足之處是必須接觸較高濃度的AFB1標(biāo)準(zhǔn)品，很多檢測(cè)人員對(duì)頻繁接觸AFB1這種具有強(qiáng)致癌作用的物質(zhì)具有很強(qiáng)的心理戒備。另外，由于生物恐怖事件屢屢發(fā)生，世界各國(guó)對(duì)于強(qiáng)毒物質(zhì)的進(jìn)出口均嚴(yán)格限制，毒素標(biāo)準(zhǔn)品已經(jīng)成為嚴(yán)重制約食品安全檢測(cè)的瓶頸。 根據(jù)Jerne提出的免疫網(wǎng)絡(luò)學(xué)說，機(jī)體對(duì)外來抗原

3、的免疫應(yīng)答將觸發(fā)一個(gè)復(fù)雜的連鎖反應(yīng)。在抗原的刺激下，機(jī)體產(chǎn)生Ab1，Ab1又刺激Ab2的產(chǎn)生，Ab2再刺激Ab3的產(chǎn)生……，如此等等，在體內(nèi)構(gòu)成了復(fù)雜的獨(dú)特型與抗獨(dú)特型的網(wǎng)絡(luò)。抗獨(dú)特型抗體(Ab2)是指針對(duì)獨(dú)特型抗體(Ab1)的獨(dú)特型抗原決定基產(chǎn)生的抗體。Ab1上不同的獨(dú)特型決定位可以刺激產(chǎn)生不同類型的Ab2，主要分為4種類型包括Ab2a、Ab2β、Ab2γ和Ab2e，其中Ab2β具有抗原“內(nèi)影像”(internalimage)的作用，

4、可模擬抗原誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)始動(dòng)抗原的特異性抗體，在體外可與Ab1上獨(dú)特型表位(IdX)相結(jié)合。Ab2β能模擬抗原的原理提供了一種新的免疫試劑，由于其和相對(duì)應(yīng)的生物毒素在空間構(gòu)象上存在著所謂的內(nèi)影像關(guān)系，利用Ab2β作為AFB1的替代品用于食品中AFB1的免疫檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)無毒檢測(cè)，并打破國(guó)際禁運(yùn)的約束，降低檢測(cè)成本。選用日本大耳白兔進(jìn)行抗抗總黃曲霉毒素單抗獨(dú)特型多克隆抗體的制備和鑒定，從靈敏度、特異性、在試劑盒中的替代效果等方面與AFB

5、1標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行對(duì)比和替代研究，并建立了玉米中AFB1的無毒ELISA檢測(cè)方法，研制出AFB1無毒ELISA檢測(cè)試劑盒，為黃曲霉毒素B1的無毒檢測(cè)提供物質(zhì)和理論依據(jù)。 結(jié)論:1.抗抗總黃曲霉毒素單克隆抗體獨(dú)特型抗體的亞類為Ab2β。 2.抗抗總黃曲霉毒素單克隆抗體獨(dú)特型抗體特異性強(qiáng)，完全可以在免疫檢測(cè)中替代黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品。 3.抗抗總黃曲霉毒素單克隆抗體獨(dú)特型抗體作為標(biāo)準(zhǔn)品的替代品與黃曲霉毒素B1毒素標(biāo)準(zhǔn)品之間