黃曲霉毒素B-,1-免疫膠乳快速檢測(cè)技術(shù)的研究.pdf

1、黃曲霉毒素B<,1>(aflatoxin B<,1>，AFB<,1>)是由寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)和產(chǎn)毒的黃曲霉(A.flavu)產(chǎn)生的一種真菌毒素，有很強(qiáng)的致癌性。許多糧油食品、飼料等都容易被AFB<,1>污染，從而危害人類(lèi)健康和畜禽生產(chǎn)。所以，幾乎所有國(guó)家和地區(qū)都規(guī)定了農(nóng)產(chǎn)品、食品和飼料中AFB<,1>的最大允許含量，并作為強(qiáng)制性檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測(cè)。 本研究首先以苯乙烯為單體，甲基丙烯酸為改性

2、劑，采用無(wú)皂乳液聚合法制備了羧化聚苯乙烯微球(carboxylated polystyrene latex particles，CPLP)，然后以牛血清白蛋白(bovine serum albumin，BSA)免疫BALB/c小鼠，制備抗BSA抗體，研究了CPLP的致敏條件。在此基礎(chǔ)上，以黃曲霉毒素B<,1>肟(aflatoxin B<,1> oxime，AFB<,1>O)與牛血清白蛋白(BSA)的連接物(AFB<,1>O-BSA)致敏

3、CPLP，采用抗AFBl抗血清，建立了AFB<,1>的免疫膠乳快速檢測(cè)技術(shù)。具體的研究?jī)?nèi)容如下。 1.CPLP的制備CPLP是在苯乙烯單體中添加甲基丙烯酸(methacylic acid，MAA)聚合而成的高分子微球。本研究以苯乙烯為單體，甲基丙烯酸作改性劑，采用無(wú)皂乳液聚合法，制備出了CPLP，并就改性劑的濃度、聚合時(shí)間和聚合溫度對(duì)膠乳溶液的穩(wěn)定性的影響、膠乳顆粒大小和苯乙烯單體的轉(zhuǎn)化率進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，當(dāng)改性劑為苯乙烯單

4、體量的10％、75℃聚合12 h時(shí)，苯乙烯的轉(zhuǎn)化率最大，達(dá)到92％，膠乳顆粒大小為240 nm。在此條件下制備的膠乳溶液，室溫放置15 d沒(méi)有出現(xiàn)沉淀。 2.膠乳致敏條件的優(yōu)化以BSA為抗原免疫6～8周齡雌性BALB/c小鼠，制備抗BSA腹水抗體。以BSA致敏CPLP，用抗BSA抗體進(jìn)行方陣滴定，觀察凝集反應(yīng)，研究了致敏條件對(duì)致敏效果的影響。結(jié)果表明，以0.05 mol/L，pH8.0的Na<,2>HPO<,4>-NaH<,2>

5、PO<,4>緩沖液(PB)稀釋CPLP乳液至1.0％，BSA的終濃度為0.5 mg/mL，37℃致敏30 min時(shí)，與1:160稀釋的腹水抗體(效價(jià)1:40,000)發(fā)生凝集反應(yīng)的效果最好。 3.AFB<,1>膠乳快速檢測(cè)試劑的制備在上述研究基礎(chǔ)上，制備了AFB<,1>膠乳快速檢測(cè)試劑，并對(duì)試劑的最低檢測(cè)限和穩(wěn)定性進(jìn)行了分析。結(jié)果表明，按上述條件制備的AFBl快速檢測(cè)膠乳試劑，AFB<,1>最低檢出限可達(dá)5 ng/mL。試劑經(jīng)適