基于膠體金免疫層析技術(shù)制備快速檢測(cè)中藥中黃曲霉毒素B1試紙條的研究.pdf

1、目的：基于膠體金免疫層析技術(shù)制備一種快速檢測(cè)蓮子、當(dāng)歸、姜粉、陳皮、西洋參、白芍中黃曲霉毒素B1(AFB1)的試紙條，以期建立簡(jiǎn)單、快速、經(jīng)濟(jì)、高效的黃曲霉毒素氏的檢測(cè)方法。
　　方法：①采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELLISA)對(duì)制備抗AFB1單克隆抗體效價(jià)評(píng)估；②采用檸檬酸三鈉還原法制備膠體金顆粒，制備的膠體金溶液經(jīng)目測(cè)法、透射電鏡掃描法、紫外分光光度計(jì)法觀察金顆粒分散均勻程度及測(cè)定平均粒徑大??；③采用間接競(jìng)爭(zhēng)膠體金免疫層析技術(shù)(In

2、direct competitive colloidal gold immune chromatography technology，ICGT),優(yōu)化納米金標(biāo)記抗體最佳偶聯(lián)濃度、金標(biāo)抗體最佳偶聯(lián)pH和包被在硝酸纖維素膜(NC)上AFB1-BSA(檢測(cè)線）和二抗羊抗鼠IgG(控制線)濃度；④采用滴加標(biāo)品溶液法，確定免疫層析試紙條的最低檢測(cè)限，考察試紙條的性能（特異性、穩(wěn)定性及重現(xiàn)性);⑤采用試紙條檢測(cè)法對(duì)市售蓮子、當(dāng)歸、姜粉、陳皮、西洋參

3、、白芍樣品中AFB1初篩，并采用UFLC-MS/MS法分別對(duì)市售6種中藥樣品中AFB1的含量進(jìn)行測(cè)定。
　　結(jié)果：①試紙條制備的研宄結(jié)果顯示：當(dāng)制備AFB1單克隆抗體濃度為3.8mg/mL，酶聯(lián)免疫吸附法(ELLISA)抗體效價(jià)1:1.0×104時(shí)，IC50為0.01ng/mL的時(shí)候，抗體效價(jià)良好；膠體金溶液在528nm處有最大吸收波長(zhǎng)，金顆粒的平均粒徑約為400nm；膠體金標(biāo)記抗體最佳標(biāo)記濃度為6μg/mL/在pH8.2下，抗體

4、與膠體金偶聯(lián)結(jié)果最佳，NC膜上最佳吸附抗原濃度(AFB1-BSA，檢測(cè)線）為0.3mg/mL，二抗羊抗鼠（IgG，控制線)最佳吸附濃度為0.5mg/mL；制備的試紙條最低檢測(cè)限為2.5ng/mL，檢測(cè)時(shí)間10min，對(duì)試紙條特異性的考察結(jié)果顯示，其性能良好。
　?、谠嚰垪l對(duì)6種中藥中AFB1初篩結(jié)果顯示：6份蓮子、9份當(dāng)歸、23份姜粉、1份白芍、9份陳皮藥材樣品中，檢測(cè)出AFB1。且含量超過(guò)2.5ng/mL，10份西洋參樣品中未檢

5、測(cè)出陽(yáng)性樣品。
　?、跮C-MS/MS定量分析結(jié)果顯示：6份蓮子樣品呈陽(yáng)性，AFB1的含量分布范圍在：4.37-7.82μg/kg；9份當(dāng)歸樣品呈陽(yáng)性，AFB1的含量分布范圍在：3.85-10.82μg/kg；23份姜粉樣品呈陽(yáng)性，AFB1的含量分布范圍在:2.53-6.82μg/kg；1份白芍樣品呈陽(yáng)性，AFB1的含量分布范圍在：2.75μg/kg;9份陳皮樣品呈陽(yáng)性，AFB1的含量分布范圍在：2.90-10.21μg/kg；西

6、洋參樣品中未檢測(cè)出陽(yáng)性樣品或低于定量限。
　　試紙條的檢測(cè)結(jié)果與LC-MS/MS結(jié)果相比較，提示制備的試紙條靈敏度、穩(wěn)定性良好，能夠滿足部分中藥中黃曲霉毒素B1初步篩查的目的。
　　結(jié)論：本研宄所制備的快速檢測(cè)中藥中AFB1的試紙條具有經(jīng)濟(jì)合理、操作簡(jiǎn)便、結(jié)果直觀、靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)。與常規(guī)的AFB1分析方法相比，試紙條檢測(cè)省略了繁瑣的操作步驟和昂貴的儀器設(shè)備。能滿足中藥材的實(shí)時(shí)、實(shí)地快速檢測(cè)目的。同時(shí)，為建立中藥材中AFB1的