量子點(diǎn)熒光微球免疫層析試紙條定量檢測玉米中的黃曲霉毒素B1.pdf

1、量 子 點(diǎn) 熒 光 微 球 免 疫 層 析 試 紙 條 定 量 檢 測 玉 米 中 的 黃 曲 霉 毒 素量 子 點(diǎn) 熒 光 微 球 免 疫 層 析 試 紙 條 定 量 檢 測 玉 米 中 的 黃 曲 霉 毒 素 B1任 美 玲任 美 玲南 昌 大 學(xué)南 昌 大 學(xué)摘要II摘 要 摘 要黃曲霉毒素B1（AFB1）是已知毒性最強(qiáng)的真菌毒素，被世界衛(wèi)生組織癌癥機(jī)構(gòu)列為Ⅰ類致癌物，許多國家制定了相應(yīng)的法律法規(guī)限制農(nóng)產(chǎn)品中AFB1的含量以減少對

2、人和動(dòng)物的危害。 本研究首次將量子點(diǎn)熒光微球作為標(biāo)記探針應(yīng)用于競爭免疫層析試紙條實(shí)現(xiàn)了對小分子物質(zhì)的檢測， 建立了基于FIT/FIC比值定量的AFB1量子點(diǎn)熒光微球免疫層析試紙條定量模型。本研究中所用商品化量子點(diǎn)熒光微球是通過摻雜CdSe/ZnS量子點(diǎn)所得，直徑為247 nm ±13 nm，同等摩爾數(shù)下量子點(diǎn)熒光微球的熒光強(qiáng)度是量子點(diǎn)的2863倍。 以量子點(diǎn)熒光微球?yàn)闃?biāo)記探針偶聯(lián)黃曲霉毒素B1單克隆抗體腹水制備了免疫層析試紙條

3、，試紙條的最佳工藝條件為：樣本墊處理液為pH 8.0的硼酸鈉緩沖液（含1.0% BSA、0.25% Tween-20和0.1% NaN3），每毫克量子點(diǎn)熒光微球的腹水蛋白質(zhì)標(biāo)記量為150 µg，熒光微球腹水標(biāo)記物所用體積為5 µL（36 μg/mL），T線抗原噴涂濃度為0.4 mg/mL，C線驢抗鼠二抗噴涂濃度為1.0 mg/mL。在此條件下探究了檢測樣品中pH、甲醇濃度以及試紙條判讀時(shí)間對試紙條免疫反應(yīng)動(dòng)力學(xué)的影響

4、。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明基于FIT/FIC比值進(jìn)行定量，在一定范圍內(nèi)有效消除了反應(yīng)時(shí)間、溶液pH及甲醇濃度對試紙條反應(yīng)動(dòng)力學(xué)的影響。本方法所建立的AFB1量子點(diǎn)熒光微球免疫層析試紙條檢測模型的線性回歸方程為y = -0.28ln (x) +1.25（R2 = 0.9942），50%抑制濃度（IC50）為13.87 ± 1.54 pg/mL（n = 3），其靈敏度比量子點(diǎn)免疫層析試紙條方法學(xué)提高了39倍 （IC50 = 0.54 

5、7; 0.06 ng/mL）， 試紙條定量檢測范圍為5~60 pg/mL，表明該熒光試紙條具有較好的檢測性能。該試紙條與AFG1、AFG2、AFM1、AFB2的交叉反應(yīng)率（Cr）分別為51.6%、0.2%、1.73%和5.58%，與桔霉素、展青霉素、赭曲霉毒素A、嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮五種毒素交叉反應(yīng)率均小于0.01%；試紙條檢測實(shí)際玉米樣品中黃曲霉毒素B1的最低檢測限為0.42 pg/mL；試紙條批內(nèi)檢測回收率在97.89%~105.

6、70%之間，批間回收率為96.32%~110.30%，且批內(nèi)批間檢測變異系數(shù)（CV）均在10%以內(nèi)。以上結(jié)果表明AFB1量子點(diǎn)熒光微球免疫層析試紙條具有良好的精密度和準(zhǔn)確度。同時(shí)采用試紙條與ELISA商品試劑盒兩種方法隨機(jī)檢測40個(gè)玉米陰性加標(biāo)樣本，結(jié)果表明二者具有良好的相關(guān)性（R2 = 0.9391）。采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）方法和試紙條對9份來源不同的谷物及飼料產(chǎn)品進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)表明兩種方法相關(guān)性很好。 以上結(jié)果