基于表面等離子體共振技術(shù)檢測(cè)食品中的黃曲霉毒素B1.pdf

1、黃曲霉毒素(AFT)是寄生曲霉和黃曲霉產(chǎn)生的致癌和致突變的化合物，它主要有黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2以及兩種代謝產(chǎn)物M1和M2。在六種化合物中，黃曲霉毒素B1(AFB1)易存在于各類食品以及農(nóng)產(chǎn)品中，是目前致癌能力最強(qiáng)的天然化合物，嚴(yán)重威脅了人類的生命安全。我國(guó)國(guó)標(biāo)(GB2761-2011)規(guī)定以糧食為主要原料的調(diào)味品中AFB1的殘留量不得超過5μg·kg-1，因此建立快速檢測(cè)食品、農(nóng)產(chǎn)品中AFB1的方法尤為重要。表面等離子體共振

2、(SPR)是動(dòng)態(tài)的、無需標(biāo)記的現(xiàn)代檢測(cè)手段。核酸適配體是能夠特異性識(shí)別目標(biāo)分子的DNA、RNA或者肽，它具有成本低、穩(wěn)定性好以及容易修飾的特點(diǎn)。本文利用SPR與適配體技術(shù)結(jié)合檢測(cè)AFB1。
　　1、本文參考文獻(xiàn)，選擇的AFB1的適配體的序列為:5'-GTTGGGCACGTGTTGTCTCTCTGTGTCTCGTGCCCTTCGCTAGGCCCACA-3'。等溫滴定量熱技術(shù)測(cè)定AFB1與AFB1-aptamer的結(jié)合特性。通過實(shí)驗(yàn)優(yōu)

3、化，最終AFB1和適配的濃度分別為5μM和64μM。在此條件下，AFB1與適配體的KA等于1.51×106±1.68×105M-1，它們之間結(jié)合計(jì)量數(shù)為0.9993±0.0205。
　　2、利用鏈霉親和素(SA)和生物素之間的高親和力，將SA偶聯(lián)于CM5芯片上，捕獲生物素修飾的AFB1核酸適配體;優(yōu)化AFB1的進(jìn)樣和解離時(shí)間，建立AFB1標(biāo)準(zhǔn)品的工作曲線。AFB1的濃度在0.19～200ng·mL-1，濃度與相應(yīng)的響應(yīng)信號(hào)成四因素

4、關(guān)系;AFB1的濃度在0.19～50ng·mL-1，濃度與相應(yīng)的響應(yīng)信號(hào)成線性關(guān)系。
　　3、通過優(yōu)化醬油和醋樣品基質(zhì)中AFB1的提取和純化方法，用已建立的SPR與適配體結(jié)合的方法完成醬油和醋樣品中AFB1的檢測(cè)。當(dāng)醋中AFB1濃度為2、10、20ng·g-1（相對(duì)于醋的質(zhì)量），該方法的平均回收率在94.1～125.9％范圍內(nèi)。
　　4、建立液質(zhì)聯(lián)用方法檢測(cè)AFB1，得到的結(jié)果與SPR方法做對(duì)比。該方法的線性范圍為1～200