赭曲霉毒素A快速檢測(cè)試紙條的研制及其在谷物類制品中的應(yīng)用.pdf

1、OTA是食品真菌毒素污染中常見的一種。廣泛分布于飼料及飼料原料中，被攝食后會(huì)累積在畜禽體內(nèi)，主要危害動(dòng)物體的腎臟，其次是肺、肝臟等。并且現(xiàn)在已有研究稱，OTA已經(jīng)成為動(dòng)物體腎病變的重要因素之一。而且近年來，動(dòng)物OTA中毒事件也頻繁發(fā)生，已經(jīng)通過食物鏈對(duì)人類健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅。因此許多國(guó)家對(duì)其制定了最高允許量，并建立了監(jiān)控檢測(cè)體系。
　　相對(duì)于傳統(tǒng)的OTA檢測(cè)方法，免疫膠體金是一種方便快捷的免疫檢測(cè)技術(shù)，在很多方面都有廣泛的應(yīng)用，如臨

2、床分析、食品安全、環(huán)境檢測(cè)等，該方法具有耗時(shí)少、特異性強(qiáng)、靈敏度高、對(duì)操作人員無太高要求等優(yōu)點(diǎn)，因此在現(xiàn)代食品檢測(cè)領(lǐng)域中發(fā)揮著重要作用。
　　本實(shí)驗(yàn)中制備的OTA膠體金試紙條，可以廣泛的應(yīng)用于谷物類飼料的檢測(cè)。恰當(dāng)?shù)臉?biāo)記條件是試紙條產(chǎn)品制備中至關(guān)重要的一步。實(shí)驗(yàn)中采用檸檬酸三鈉還原法制備膠體金，探索了幾個(gè)可能影響膠體金顆粒均勻性的因素。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在制備膠體金過程中，采用煮沸后相繼快速加入氯金酸和檸檬酸三鈉的方式制備出的金粒更均勻；

3、金標(biāo)制作中的離心條件為10000 r/min，20 min；最適pH為1 mL膠體金添加7μL，0.2 mol/L的K2CO3，最佳蛋白標(biāo)記量為1 mL膠體金添加7μg單抗；T線上抗原的適宜包被濃度為0.4 mg/mL，C線上羊抗鼠IGg的適宜包被濃度為0.4 mg/mL；金標(biāo)抗體的復(fù)原液為pH8.5，0.02 mol/L Tris含1％BSA、5%蔗糖；樣品墊處理液為pH8.5，0.02 mol/L Tris中含1%BSA、1%Twe

4、en-20和0.5%蔗糖；試紙條的檢測(cè)靈敏度為15 ng/mL，與OTB、AFB1、DON、ZEN和T-2毒素的交叉反應(yīng)率為0%，在室溫條件下至少可存放3個(gè)月。
　　檢測(cè)過程中，高效率的樣品提取液，也是該方法檢測(cè)中關(guān)鍵的一步。本實(shí)驗(yàn)中以一定體積比的甲醇溶液，含有一定質(zhì)量分?jǐn)?shù)的NaHCO3作為提取液。經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，大麥粉、蕎麥粉、燕麥片和全麥面包用55%（v:v）的甲醇-水，含3%的NaHCO3溶液能達(dá)到較為理想的提取效果，而谷物飼料