黃曲霉毒素B1間接競爭ELISA試劑盒的研制.pdf

1、黃曲霉毒素B1是目前發(fā)現(xiàn)毒性最強、致癌性最高的化學物質(zhì)之一，主要是由黃曲霉和寄生曲霉寄生產(chǎn)生的的代謝產(chǎn)物，理化性質(zhì)穩(wěn)定，易于污染，在農(nóng)產(chǎn)品、蔬菜、加工食品、飼料等中常被檢測出。黃曲霉入侵到食物鏈中，將產(chǎn)生對應的黃曲霉毒素，人體或動物一旦食用將對機體產(chǎn)生巨大的危害。目前，世界各國對農(nóng)產(chǎn)品、食品、飼料等中黃曲霉毒素 B1含量都有嚴格的限制。避免黃曲霉毒素在食物鏈中的污染，不僅僅是在農(nóng)產(chǎn)品原料方面的防控，在農(nóng)產(chǎn)品材料貯藏、食品加工、物流流通環(huán)

2、節(jié)更要進行檢測監(jiān)督。
　　我國對黃曲霉毒素B1檢測技術(shù)的研究工作進行了許多年，不同的技術(shù)手段形成檢測技術(shù)30余種，國際上權(quán)威的檢測方法是利用高效液相法進行檢測，我國也執(zhí)行此項檢測法，但該方法成本較高、不利于操作，樣品的前處理繁瑣，檢測流程整體時間較長，不利于監(jiān)測部門對市場的動態(tài)監(jiān)督。間接競爭ELISA方法是利用抗原抗體相互結(jié)合，酶標二抗加入后與底物反應顯色以確定檢測物含量的實驗技術(shù)，該實驗技術(shù)轉(zhuǎn)化為試劑盒產(chǎn)品將形成具有對樣品的前處

3、理要求低，便于操作，而且能大大縮短檢測時間的可推廣化產(chǎn)品。
　　本項目研制的間接競爭ELISA試劑盒，通過條件的優(yōu)化，確定了所需的包被抗原最佳加入量為50ng/孔，黃曲霉毒素B1單克隆抗體加入量為100ng/孔，二抗稀釋比例為1:500最合適；所研制的間接競爭ELISA試劑盒檢測結(jié)果較高效液相法（HPLC）對比符合率大于98％，檢測結(jié)果與國際認可方法一致；試劑盒的準確度研究采取了檢測大米、玉米、花生中黃曲霉毒素B1的檢測，結(jié)果顯示

4、大米檢測回收率為：85%-91%，玉米檢測回收率為：84%-94%，花生檢測回收率為：88%-92%，回收率均符合國家標準回收率70%-120%范圍，說明了研制的試劑盒檢測結(jié)果的準確度高；試劑盒靈敏度研究，進行了對大米、玉米、花生的檢測限分析，結(jié)果顯示出該試劑盒對大米的檢出限為：0.25μg/kg，玉米的檢出限為：0.30μg/kg，花生的檢出限為：0.30μg/kg，說明了該試劑盒的檢測限靈敏且比國家標準檢出限更低更；試劑盒精密的研究