黃曲霉毒素試劑盒 說明書

1、RIDREENAflatoxinTotal酶聯(lián)免疫法定量檢測黃曲霉毒素總量（R4701）酶標(biāo)免疫分析定量檢測黃曲霉毒素總量。德國RBiopharm公司制造（中文翻譯件僅供參考，以試劑盒內(nèi)附的英文原件為準(zhǔn)）簡介RIDREENAflatoxinTotal（訂貨號：R4701）黃曲霉毒素總量檢測試劑盒，采用競爭性酶聯(lián)免疫法定量測定谷物和飼料中的黃曲霉毒素的總含量。試劑盒中含有酶聯(lián)免疫檢測所需的所有試劑，包括標(biāo)準(zhǔn)品。試劑盒足夠進(jìn)行96次檢測（包

2、括標(biāo)準(zhǔn)測定）。定量分析需要使用微孔板酶標(biāo)儀。樣品處理：谷物和飼料樣品：提取、過濾和稀釋檢測時間：樣品制備（以10個樣品為例）谷物和飼料樣品：.............................約30分鐘檢測過程（孵育時間）...........................45分鐘檢測限：谷物和飼料樣品：....................約1.75ppb（以標(biāo)準(zhǔn)品為基礎(chǔ)測得）回收率：約85%（以標(biāo)準(zhǔn)品為基礎(chǔ)測得）變異系數(shù)的

3、中間值為15%特異性：RIDREENAflatoxinTotal黃曲霉毒素總量檢測試劑盒的特異性根據(jù)與相關(guān)霉菌毒素的交叉反應(yīng)確定。黃曲霉毒素B1....................................100%黃曲霉毒素B2....................................約48%黃曲霉毒素G1...................................約75%黃曲霉毒素G2........

4、...........................約18%1.用途RIDREENAflatoxinTotal（訂貨號：R4701）黃曲霉毒素總量試劑盒，采用競爭性酶聯(lián)免疫法定量測定谷物和飼料中的黃曲霉毒素的總量。2.概要黃曲霉毒素是霉菌Aspergillusflavus及Aspergillusparasiticus的二級代謝產(chǎn)物。這些霉菌生長于熱帶潮濕地區(qū)。在農(nóng)業(yè)國家中經(jīng)常出現(xiàn)因其導(dǎo)致的植物性食品污染現(xiàn)象。黃曲霉毒素是最強(qiáng)的產(chǎn)生于自

5、然界的致癌物質(zhì)之一。黃曲霉毒素B1常和B2、G1和G2同時出現(xiàn)，具極強(qiáng)的毒性，通常存在于玉米、花生、巴西堅果、棉籽和開心果中。鑒于這些霉菌毒素的毒性，歐盟國家規(guī)定，黃曲霉毒素B1的殘留限量值為2ppb（ppb即：ugL（微克升）），黃曲霉毒素總殘留限量值為4ppb。3.測定原理檢測的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)。微孔板包被有針對黃曲霉毒素抗體的捕獲抗體。加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液、酶標(biāo)記黃曲霉毒素（酶連接物）和黃曲霉毒素抗體。游離的黃曲霉毒素和酶連接物

6、競爭黃曲霉毒素抗體結(jié)合位點(diǎn)（競爭性酶聯(lián)免疫分析）。同時黃曲霉毒素抗體也與微孔板上固定的捕獲抗體結(jié)合。沒有結(jié)合的酶連接物在洗滌步驟中被除去。在孔中加入底物（過氧化脲）和發(fā)色劑（四甲基對二氨基聯(lián)苯），結(jié)合的酶連接物將發(fā)色劑轉(zhuǎn)化為藍(lán)色。加入反應(yīng)終止液后顏色由藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。在450nm處測量，吸光度值與樣品中的黃曲霉毒素濃度成反比。4.提供的試劑每一個盒中的試劑足夠進(jìn)行96個測量（包括標(biāo)準(zhǔn)測定孔），盒中的材料如下：1x96微孔板（12條每條8

7、孔）包被有針對黃曲霉毒素抗體的捕獲抗體6x標(biāo)準(zhǔn)品濃縮液，（每瓶1.3ml）?每孔取50μl進(jìn)行檢測備注：如果黃曲霉毒素的含量預(yù)計大于120ppb，必須繼續(xù)對樣品繼續(xù)進(jìn)行稀釋，而使用的樣品稀釋緩沖液中必須含有10%的甲醇。（比如：9ml的樣品稀釋緩沖液1ml的甲醇（100%））。所有的樣品都必須用含有10%甲醇的樣品緩沖液進(jìn)行稀釋。濾液可以在冰箱（28C）中保存2個星期，在冷凍條件下（20C）可以保存兩個月。應(yīng)使用棕色玻璃瓶避光保存。除了

8、谷物和飼料樣品外，同樣適用于其他的食品樣品。然而根據(jù)我們的經(jīng)驗，一些樣品比如堅果、藥草、調(diào)料和茶葉，若不使用免疫親和柱進(jìn)行樣品處理，則會出現(xiàn)過高的背景值。因此我們建議您在檢測此類樣品時，索要RIDAAflatoxincolumn黃曲霉毒素免疫親和柱（R5001R5002）的產(chǎn)品信息?？筛鶕?jù)需求提供RIDAflatoxincolumn黃曲霉毒素免疫親和柱（R5001R5002）針對生咖啡樣品的處理方法。請注意，在使用RIDAAflatox

9、incolumn（R5001R5002）進(jìn)行樣品處理后，提取液需要在蒸餾水中進(jìn)行1:10的稀釋。在這步稀釋之后，如果還需要做任何稀釋，請使用10%的甲醇水溶液進(jìn)行稀釋。10.酶標(biāo)免疫分析程序10.1.檢測前的準(zhǔn)備使用之前將所有試劑回溫至室溫（2025C）。洗滌緩沖液是PBSTween緩沖液，為此試劑盒中提供了一袋洗滌緩沖液鹽（參見4.）。使用1l蒸餾水溶解一袋洗滌緩沖液鹽制得緩沖液。制備好的緩沖液可在28C下保存大約46周時間?；蛘撸河?/p>

10、100ml蒸餾水溶解袋中的洗滌緩沖液鹽，得到10倍的洗滌緩沖液鹽濃縮液，此溶液能在室溫（2025C）下儲存812周。使用時，用9份蒸餾水溶解1份此濃縮液得到洗滌緩沖液10.2測定程序（在2025℃條件下操作）仔細(xì)進(jìn)行洗板的操作非常重要。在使用中不要讓微孔出現(xiàn)干燥。1.將足夠標(biāo)準(zhǔn)品和樣品檢測所需數(shù)量的孔條插入微孔板架。記錄標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置。2.將50μl標(biāo)準(zhǔn)品或者按照步驟9處理后的樣品加入相應(yīng)的微孔中，均做兩個平行實(shí)驗。3.向每一個對應(yīng)

11、的微孔中加入50μl酶連接物溶液4.向每一個對應(yīng)的微孔中加入50μl抗體溶液，充分混合后在室溫下（2025C)）在暗處孵育30分鐘。5.倒出孔中的液體，將微孔板架倒置在吸水紙上拍打（每輪拍打3次）以保證完全除去孔中的液體。加入250μl洗滌緩沖液（參見10.1.）洗滌，上述操作重復(fù)進(jìn)行兩遍。6.向每一個微孔中加入100μl底物發(fā)色劑（棕色瓶蓋），充分混合后在室溫下（2025C）暗處孵育15分鐘。7.向每一個微孔中加入100μl反應(yīng)終止液

12、（黃色瓶蓋），充分混合。在加入反應(yīng)終止液后30分鐘內(nèi)于450nm處測量吸光度值。11.結(jié)果所獲得的標(biāo)準(zhǔn)和樣品吸光度值的平均值除以第一個標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值再乘以100。因此0標(biāo)準(zhǔn)等于100%并且以百分比給出吸光度值。標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值（或樣品）x100=%吸光度值0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值計算的標(biāo)準(zhǔn)值繪成為一個以黃曲霉毒素B1濃度（gkg）的半對數(shù)坐標(biāo)系統(tǒng)曲線圖，相對應(yīng)每一個樣品的濃度（gkg）可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出。為了真實(shí)反映黃曲霉毒素的濃度n