實驗感染黃曲霉毒素雛鴨的病理學(xué)及免疫組化檢測石蠟切片中黃曲霉毒素的研究.pdf

1、應(yīng)用組織學(xué)切片技術(shù)、超薄切片技術(shù)對黃曲霉毒素(AFB1)實驗感染雛鴨病理學(xué)變化、超微結(jié)構(gòu)變化進行觀察；通過觀察雛鴨采食不同AFB1脫毒劑處理飼料后的病理學(xué)變化進行了脫毒劑脫毒效果的比較研究；用抗AFB1單克隆抗體建立了檢測石蠟切片中AFB1的免疫組織化學(xué)技術(shù)并應(yīng)用于AFB1實驗感染雛鴨后的檢測及毒素在細胞中的定位研究，獲得如下系列成果： 1.7日齡櫻桃谷鴨飼喂黃曲霉毒素(AFB1)含量為150bbp的全價飼料，分別于12、24、

2、48、72、96、120、144、168、192小時各剖殺2只，觀察并取心、肝、脾、肺、腎、腦、十二指腸、胰腺等組織。 (1)眼觀特征病變：氣囊有黃色纖維性物質(zhì)滲出，肝腎腫大、質(zhì)地變脆等。 (2)組織病理學(xué)變化：肝臟，肝細胞空泡變性，膽管增生。肝小葉內(nèi)和匯管區(qū)有小灶性的漿細胞浸潤和嗜酸性粒細胞浸潤，及后期肝細胞極度腫脹；腎臟，腎小管上皮細胞發(fā)生顆粒變性，小灶性浸潤假嗜伊紅白細胞。腎血管球腫大，毛細血管淤血，腎小囊體積減小

3、。后期腎小管上皮細胞散在的凝固性壞死；脾臟，紅髓淤血，小灶性浸潤嗜酸性粒細胞。脾竇擴張，部分脾竇內(nèi)有少量漿液；大腦，被膜擴張，實質(zhì)毛細血管間隙擴張；心臟，心外膜水腫增厚，少量槳細胞和嗜酸性粒細胞浸潤。心肌纖維間質(zhì)水腫增寬，肌纖維顆粒變性。后期局部心肌纖維濃染伊紅，細胞核濃縮；十二指腸，黏膜上皮脫落，腺上皮細胞顆粒變性。環(huán)形肌纖維水腫增寬，發(fā)生空泡變性。后期環(huán)形肌纖維肌層肌漿著染伊紅不均呈竹節(jié)狀；胰腺，外分泌腺腺上皮細胞顆粒變性，分泌顆粒

4、減少淡染。后期有散在外分泌腺腺上皮細胞細胞核濃縮，胞漿深染伊紅；肺臟，毛細血管淤血，間質(zhì)水腫增寬。 (3)超微結(jié)構(gòu)變化：肝臟，肝細胞中空泡的大量聚集導(dǎo)致細胞核變形，糖原減少，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張囊泡化；腎臟，腎上皮細胞線粒體腫脹變形，嵴斷裂溶解呈空泡狀，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張囊泡變，細胞核核膜擴張；大腦，有髓神經(jīng)纖維髓鞘溶解，神經(jīng)元胞體內(nèi)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張，毛細血管內(nèi)皮細胞間隙擴張；胰腺，胰腺細胞染色質(zhì)凝集，酶原顆粒減少；十二指腸，腸腺細胞部分線

5、粒體腫脹、嵴斷裂。 2.用脫毒劑1、脫毒劑2、脫毒劑3和脫毒劑4四種脫毒劑處理含黃曲霉毒素的飼料作為四個試驗組(試驗組Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)分別飼喂雛鴨，取肝、腎等組織器官進行病理學(xué)比較觀察，從而比較四種脫毒劑的脫毒效果。各組出現(xiàn)典型病理變化時間從早到晚以及病變程度由重到輕的順序依次是試驗組Ⅳ、試驗組Ⅰ、試驗組Ⅱ、試驗組Ⅲ，結(jié)果表明在本次試驗條件下，各脫毒劑的脫毒效果依次是脫毒劑3、脫毒劑2、脫毒劑1、脫毒劑4。 3.用抗AF

6、B1單克隆抗體建立了免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測石蠟切片中黃曲霉毒素的方法，該法特異性強，能對AFB1在機體組織器官內(nèi)的分布進行準確定位。檢測AFB1在雛鴨組織中的結(jié)果為：首先在肝臟和腎臟中檢測到AFB1，隨后在脾臟、胰腺、十二指腸、心臟及法氏囊檢測到，其中肝臟和腎臟的陽性結(jié)果最強。AFB1主要分布于肝臟肝竇及匯管區(qū)周圍炎性反應(yīng)帶的肝細胞，腎臟腎小管、集合管上皮細胞以及腎小球毛細血管，脾臟白髓及炎性細胞，胰腺腺上皮細胞，十二指腸脫落的黏膜上皮細