牛奶中黃曲霉毒素M1降解菌株的篩選及鑒定.pdf

1、黃曲霉毒素(Aflaloxin， AFT)是由 Aspergilfusft avar.Aspergillumsnomw.Aspergiiluspa rariticus等多種真菌產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物，具有很強的毒性、致癌性、致突變性和致畸性，對人類和家畜的健康危害很大。采用微生物或其產(chǎn)生的酶來對其進行脫毒處理條件相對溫和，不會破壞產(chǎn)品的品質，而且有些還能增加產(chǎn)品的營養(yǎng)價值。
　　本研究旨在篩選并鑒定出能夠降解黃曲霉毒素M1(AFM1)

2、的菌株，從而能夠在AFM1的生物降解中得到應用。本研究首次分離并鑒定了能夠顯著降解AFM1的菌株—纖維纖維微菌(Cellulosimicrobium cellulans)，并通過對其發(fā)酵條件的優(yōu)化，將其對AFM1的降解率提高到78.9％。
　　本研究主要包括以下內容:
　　第一部分:能夠降解AFM1的細菌的篩選。本研究從動物腸道、奶牛養(yǎng)殖場土壤環(huán)境中分離出能夠以香豆素為唯一碳源和能源的細菌，共計13株。將AFM1以0.1μg

3、/kg的濃度添加到牛奶中，人工制備AFM1污染樣品。將篩選到菌株的發(fā)酵液50μL添加到50mL人工制備的樣品中，37℃處理72h，采用高效液相色譜法測定樣品中AFM1濃度，計算降解率。結果表明，13株細菌對AFM1降解率的差異明顯，其中編號為N4-5-2的菌株對AFM1降解率最高，為61.11％。
　　第二部分:對AFM1降解率最高的N4-5-2菌株的鑒定。本研究從形態(tài)學、生化反應以及16S rDNA序列比對等方面，對N4-5-2

4、進行鑒定，結果為纖維纖維微菌(Cellulosimicrobium cellulans)，屬放線菌門(Actinobacteria class)，放線菌目(Actinomycetales order)，微球菌亞目(Micrococcineae suborder)，纖維微菌屬（Cellulosimicrobium sp.）。該菌在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上菌落為淺黃色，表面光滑，略突起，半透明，邊緣整齊的圓形菌落，用接種針挑起時有膠狀粘連，為革蘭氏

5、陽性球形菌體，直徑0.5μm，單個、成對或成堆排列。使用16S rDNA通用引物進行擴增，并將擴增產(chǎn)物測序，在NCBI數(shù)據(jù)庫中比對后，使用MEG4.1對序列相似度進行計算，并做系統(tǒng)發(fā)育分析，確認為纖維纖維微菌。
　　第三部分:N4-5-2發(fā)酵條件對AFM1降解率的影響。本部分研究了發(fā)酵溫度、起始pH值和轉速等三個因素對AFM1降解率的影響。結果表明影響因素顯著性依次是:起始pH值＞溫度＞轉速。其中溫度和起始pH值為顯著因素，轉速為