花生油中黃曲霉毒素B1的降解及其安全性評價.pdf

1、黃曲霉毒素（Aflatoxin，AFT）是一類由黃曲霉（Aspergillus flavus）和寄生曲霉（Aspergillus parasiticus）等真菌在一定條件下產生的次級代謝產物，其中以黃曲霉毒素B1的毒性最強，具有致癌、致畸、致突變作用，被國際癌癥研究機構賦予“一級致癌物質”稱號。AFT污染是影響花生及其制品消費安全和出口貿易的主要原因，尋找一種快速檢測技術和去毒方法有較強的實際應用價值。
　　本課題的研究對象為花生

2、油中的黃曲霉毒素B1，尋求建立一種酶聯(lián)免疫快速檢測技術，同時比較用60Co輻照和微波輻照手段對黃曲霉毒素B1的去毒效果，并對處理后的花生油的主要理化指標和降解產物的安全性進行評價。
　　影響AFB1-O合成主要影響因子的單因素實驗和正交試驗結果表明：在起始質量比AFB1/CMO=1:2、反應時間5h、反應溫度65℃條件下肟化率最高可達96.7％；影響肟化率的強弱因素依次為：AFB1/CMO起始質量比>反應時間>反應溫度。AFB1-

3、BSA（即完全抗原）的最佳合成條件為：AFB1-O/BSA起始摩爾比為30:1，23℃振搖避光反應20h。AFB1-OVA（即包被抗）原最佳合成條件為：交聯(lián)劑起始摩爾比EDC/NHS=4:1，23℃避光反應12h。
　　用人工合成抗原免疫小鼠而得到抗體，測定多抗血清效價為1:3200；半抑制濃度為IC50=3.25ng/mL；與AFM1的交叉反應率為3.1%，玉米赤酶烯酮、嘔吐毒素的交叉反應率均小于0.28%。
　　將得到的

4、抗體適當稀釋，用棋盤滴定法測得最適工作濃度為：抗體稀釋13000和酶標抗原稀釋16000倍。由實驗得出黃曲霉毒素B1酶聯(lián)免疫試劑盒最佳工作條件參數為：抗體包被時間為4℃下包被12h，明膠封閉時間為4℃下封閉12h，抗原抗體特異性反應溫育時間為避光反應30min，顯色時間為室溫下反應10min。加速破壞性實驗證明：該試劑盒在4℃條件下至少可以保存30天，ELISA試劑盒與HPLC檢測結果相比無顯著性差異。樣品前處理方法簡單有效，經有機溶劑

5、提取，測定結果與國標法相近。
　　黃曲霉毒素B1的降解實驗結果證明：隨60Co輻照劑量的增大，降解率隨之增加；當AFB1的初始含量小于25ppb時，10kGy的輻照劑量可以完全去除花生油中AFB1。微波輻照降解經單因素實驗和響應面實驗結果可知：各因素對AFB1降解率影響程度依次為：微波作用時間>微波功率>AFB1初始含量，三因素都達到了極顯著水平。根據響應面實驗分析得出降解AFB1最佳條件參數為：AFB1初始含量為13.72ppb

6、、微波功率803.98W、微波作用時間10.27min，得到AFB1降解率的的預測值為96.0055%。在微波降解AFB1最佳處理條件下，檢測花生油主要理化指標酸值、碘值、過氧化值、維生素E和反式脂肪酸均未發(fā)生顯著變化，符合國家相關標準。
　　經Ames實驗可知：添加S9代謝活化系統(tǒng)的陽性對照組（即未降解的AFB1）菌落回復突變數與AFB1劑量間存在顯著的劑量-反應關系；而陽性對照組（即未降解的AFB1）只有在加入S9代謝活化系統(tǒng)

7、時，菌落回復突變數與自發(fā)回復突變組相比，除5ng劑量組外，差異達到顯著（a＜0.01）或極顯著（b＜0.01）。無論是否添加S9代謝活化系統(tǒng)，陽性組（即AFB1微波降解產物）在不同劑量下誘發(fā)的菌落回復突變數與自發(fā)回復突變組相比，無顯著差異（p>0.05）。說明微波輻照降解花生油中AFB1所產生的降解產物毒性完全消失。由此可知：AFB1經微波降解后，其降解產物對TA98、TA100和TA102菌株均不呈現(xiàn)劑量-反應關系，說明微波輻照AFB