預(yù)封裝·質(zhì)粒小提試劑盒說(shuō)明書(shū)

1、1預(yù)封裝預(yù)封裝質(zhì)粒小提試劑盒（質(zhì)粒小提試劑盒（48孔板）孔板）PlasDNAExtractionKit(MagicBeads)目錄號(hào)：目錄號(hào)：PDEPP5001運(yùn)輸條件：運(yùn)輸條件：2~25℃；保存條件：保存條件：主試劑板2~8℃，①、③、④、⑤號(hào)溶液2~8℃保存，其他組分室溫；試劑盒組成：試劑盒組成：KitComponent試劑盒組成試劑盒組成4塊板塊板適用于適用于164份樣品份樣品24塊板塊板適用于適用于164份樣品份樣品①PDEPB

2、uffer1質(zhì)粒懸浮液15mL80mL②PDEPBuffer2質(zhì)粒裂解液15mL80mL③PDEPBuffer3質(zhì)粒復(fù)性液25mL150mL④EluteBuffer洗脫液5mL10mL試劑⑤RNaseA100mgmL60μL320μL預(yù)封裝部分試劑板16T板4板16T板24板耗材磁棒套2個(gè)包4包2個(gè)包24包特別說(shuō)明：特別說(shuō)明：1）使用前請(qǐng)將）使用前請(qǐng)將⑤RNaseA全部加入全部加入①PDEPBuffer1中，并置于中，并置于4℃保存；保

3、存；2）使用前先檢查）使用前先檢查②PDEPBuffer2是否出現(xiàn)渾濁，如有混濁現(xiàn)象，置于是否出現(xiàn)渾濁，如有混濁現(xiàn)象，置于37℃水浴幾分鐘，即可恢水浴幾分鐘，即可恢復(fù)澄清。澄清。②PDEPBuffer2和③PDEPBuffer3使用后應(yīng)立即蓋緊蓋子；使用后應(yīng)立即蓋緊蓋子；3）本操作指南經(jīng)公司反復(fù)驗(yàn)證，使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀，并且按照操作指南的建議操作。）本操作指南經(jīng)公司反復(fù)驗(yàn)證，使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀，并且按照操作指南的建議操作。預(yù)封裝質(zhì)粒小提試劑

4、盒（48孔板）3【儀器自動(dòng)提取操作步驟儀器自動(dòng)提取操作步驟】（以英芮誠(chéng)（以英芮誠(chéng)ETP300型全自動(dòng)核酸提取儀為例，同步可完成型全自動(dòng)核酸提取儀為例，同步可完成32個(gè)樣本的提取）個(gè)樣本的提?。?準(zhǔn)備準(zhǔn)備1）從試劑盒中取出獨(dú)立包裝的試劑板，用甩板機(jī)（500rpm離心1min）使試劑及磁珠都集中到孔板底部，使用前小心撕去鋁箔封口膜，避免孔板振動(dòng)，防止液體濺出。2）將⑤RNaseA全部加入溶液①PDEPBuffer1中，將其與③PDEPBuf

5、fer3于4℃保存待用。2收集菌體收集菌體將48孔板培養(yǎng)的菌液做好記錄，4000rpm離心5min收集菌體，棄培養(yǎng)液，將離心后的48孔板倒扣在清潔的吸水紙上數(shù)次，盡量去除殘留的培養(yǎng)液。備注：不同品牌和型號(hào)的甩板機(jī)離心效果或有差異，請(qǐng)?jiān)谑站鷷r(shí)和復(fù)性后離心時(shí)確保沉淀緊附于48孔板底。3菌體懸浮菌體懸浮向收集好的菌體沉淀中加入200μL①號(hào)溶液（質(zhì)粒小提懸浮液），將48孔板在4000rpm下渦旋混合1~2min，確保菌體徹底重懸。4菌體裂解：

6、菌體裂解：2min向菌體懸浮液中加入200μL②號(hào)溶液（質(zhì)粒小提裂解液），開(kāi)始2min倒數(shù)計(jì)時(shí)，將48孔板在400~500rpm溫和渦旋混合1min，使菌體充分裂解，直到裂解液基本澄清，靜置至2min倒計(jì)時(shí)結(jié)束。備注：如果菌體較多，可以適當(dāng)延長(zhǎng)裂解時(shí)間至4min，但不宜超過(guò)4min，菌體裂解時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)使質(zhì)粒難以復(fù)性。5質(zhì)粒復(fù)性：質(zhì)粒復(fù)性：向菌體裂解液中加入350μL③號(hào)溶液（質(zhì)粒小提復(fù)性液）；將48孔板在700rpm溫和渦旋混合1min

7、，充分混勻，比較好的狀態(tài)是整個(gè)孔板內(nèi)的沉淀為蛋花狀。將48孔板在甩板機(jī)上4000rpm低溫離心15min，若沉淀未貼附于孔板底部，繼續(xù)離心5min，使之在孔道底部形成白色沉淀。備注：(1)③號(hào)溶液（質(zhì)粒小提復(fù)性液）務(wù)必提前4℃冷藏，并且每次吸取前盡量搖晃均勻(2)如果離心后上清中還有白色沉淀，或發(fā)現(xiàn)孔道底部沉淀松散，可以再次離心10min。6自動(dòng)化提取自動(dòng)化提取轉(zhuǎn)移質(zhì)粒復(fù)性后的上清液600μL到預(yù)分裝試劑板的28列孔位，吸取上清時(shí)切勿吸