酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

1、4(TLR4)elisaimmuneelisakitManualfile1799270Fromcollectsclassifiestheglobalproductinstrunctionmanualstohelpusersaccessanytimeanywherehelpingusersmakebetteruseofproducts.Home:Chinese:ThisManual:file1799270實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理將

2、TLR4抗體包被于96孔微孔板中，制成固相載體，向微孔中依次加入標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本，其中的TLR4與連接于固相載體上的抗體結(jié)合，洗板之后加入生物素化的TLR4抗體，將未結(jié)合的生物素化抗體洗凈后，加入HRP標(biāo)記的親和素，再次徹底洗滌后加入底物(TMB)顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的TLR4呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（值），計(jì)算樣品濃度。標(biāo)本的采集與保存標(biāo)本的采

3、集與保存標(biāo)本的采集與保存標(biāo)本的采集與保存1、血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置30分鐘或4過(guò)夜，然后1000g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?0或80保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。2、血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于281000g離心15分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?0或80保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。3、組織勻漿：將動(dòng)物的組織標(biāo)本先用PBS洗滌，去除多余血液，勻漿化后放在5~1

4、0mlPBS中于20℃放置過(guò)夜，第二天，經(jīng)過(guò)二次反復(fù)凍融破膜，將勻漿物5000xg離心5分鐘，取上清即可檢測(cè)。4、其它生物標(biāo)本：請(qǐng)1000g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?0或80保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。注意：注意：注意：注意：1、以上標(biāo)本均需密封保存，4保存應(yīng)小于1周，20不應(yīng)超過(guò)1個(gè)月，80不應(yīng)超過(guò)2個(gè)月。2、標(biāo)本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫，不應(yīng)加熱使之融解。3、標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。試劑

5、準(zhǔn)備試劑準(zhǔn)備試劑準(zhǔn)備試劑準(zhǔn)備1、使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(1825)，試劑不能直接在37溶解。2、標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）：每瓶標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液稀釋至1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒搓動(dòng)以助溶解，其濃度為100ngmL(貯液)。先將其稀釋為10ngmL(標(biāo)準(zhǔn)曲線最高濃度)后，再準(zhǔn)備7個(gè)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管，每個(gè)EP管中加入500的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成10ngmL，5n

6、gmL，2.5ngmL，1.25ngmL，0.625ngmL，0.312ngmL，0.156ngmL，標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液（0ngmL)直接作為空白孔。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。TubeTubeTubeTube111122223333444455556666777788889999ngmLngmLngmLngmL1001001001001010101055552.52