小鼠β-防御素-9的原核表達及其多克隆抗體的制備.pdf

1、β-防御素是近年來發(fā)現(xiàn)的具有數(shù)十個氨基酸組成的陽離子小肽，具有廣譜抗微生物活性。本論文使用基因工程方法重組表達可溶性小鼠β-防御素-9。采用大腸桿菌原核表達系統(tǒng)，建立了從獲得基因、載體構建到表達優(yōu)化及放大，直至產(chǎn)物分離、多克隆抗體制備整套技術體系。主要的方法與研究結果如下：
　　 1.本文利用進行了密碼子優(yōu)化的β-防御素-9表達菌種BL21（DE3）/pET-32a（+）-rDefb9，考慮誘導溫度、誘導劑量、誘導時機、表達時機

2、等因素，進行搖瓶發(fā)酵條件優(yōu)化。獲得優(yōu)化培養(yǎng)條件為：誘導溫度為28℃，IPTG量為0.8 mmol·L-1，誘導時機為對數(shù)生長期中期，誘導后表達3h終止。
　　 2.對所得重組小鼠β-防御素-9（rDefb9）的分離工藝進行了探索，經(jīng)過了Ni離子親和層析，甲酸裂解融合蛋白等一系列處理，得到了純度較高的成熟的重組rDefb-9。
　　 3.采用純化的原核表達重組蛋白免疫家兔，制備rDefb-9的多克隆抗體，然后以酶聯(lián)免疫吸附