原核表達小鼠嗅覺受體MOR28及其多克隆抗體的制備.pdf

1、哺乳動物每個嗅覺感受神經(jīng)(OSN，olfactorysenseneurones)從超過數(shù)百個甚至上千個嗅覺受體(OR，olfactoryreceptor)基因中，只選擇一個進行表達，這種表達調(diào)控方式是產(chǎn)生嗅覺的遺傳學基礎。經(jīng)過相關研究實驗推測，OR的這種表達方式的調(diào)控機制包括OR的負調(diào)控作用：當每個OSN成功表達一個有功能的OR后，此OR將抑制其它OR的表達，使OSN只表達這個OR。但在此過程中，OR具體是如何反饋抑制其他OR的表達，現(xiàn)

2、在仍不清楚。 OR蛋白進行反饋調(diào)控的具體途徑有以下幾種可能性：1.OR結合到其它轉錄因子或上游激活因子上，使其失活或活性大大降低，以進行反饋調(diào)控；2.OR直接或與其它轉錄因子共同作用，結合到相關的順式調(diào)控元件上，使此順式調(diào)控元件的活性受到抑制，以進行負調(diào)控。 本實驗旨在原核表達小鼠嗅覺受體28(MOR28)，并制備其多克隆抗體。此抗體將用于對上述OR蛋白反饋調(diào)控具體途徑的推理進行研究。 以小鼠基因組DNA為

3、模板擴增出小鼠嗅覺受體28基因的部分序列smor28(shortmiceolfactoryreceptor)，將其連接到pET28a(+)骨架載體上，構建原核表達載體pMOR28。pMOR28表達載體誘導表達，SDS-PAGE檢測目的蛋白的表達情況。利用Ni-NTA瓊脂糖提純表達的目的蛋白SMOR28，SMOR28經(jīng)透析除鹽，凍干濃縮后，免疫兔子制備其抗兔多克隆抗體。經(jīng)westenblotting檢測，SMOR28的抗兔多克隆抗體特異性