2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語一試題真題（含答案詳解+作文范文）_第1頁
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1、萊茵衣藻是具有兩條等長(zhǎng)纖毛的一種單細(xì)胞真核藻類，是研究纖毛的組裝、解聚與功能的模式生物。纖毛是一種細(xì)胞天線，負(fù)責(zé)胞外信息向胞內(nèi)的傳遞，其組裝與維持依靠纖毛內(nèi)運(yùn)輸(IFT)機(jī)制。纖毛在結(jié)構(gòu)或功能上的缺陷會(huì)導(dǎo)致在人體統(tǒng)稱為“纖毛病”的遺傳性疾病，如肥胖癥、糖尿病、先天性心臟病、多囊腎病等。然而，目前人們對(duì)調(diào)控纖毛內(nèi)運(yùn)送的機(jī)制知之甚少。
　　纖毛內(nèi)運(yùn)送蛋白IFT46是IFT復(fù)合物B的一個(gè)重要組分，它在不同的物種中都是高度保守的，且在纖毛

2、內(nèi)運(yùn)輸、纖毛的組裝與解聚中均發(fā)揮著重要作用。為深入研究其功能，蛋白質(zhì)水平和分子水平上的研究是必需的，因此本實(shí)驗(yàn)通過制各高效價(jià)和高特異性的IFT46抗體為后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。
　　本研究利用ift46基因全序列分別構(gòu)建了帶有GST和MBP標(biāo)簽的原核表達(dá)載體pGEX-2T-IFT46和pMAL-c2X-IFT46，通過轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)菌株并用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，以15％ SDS-PAGE鑒定，分別獲得分子量為70、86 kD

3、a的表達(dá)ITF46的重組蛋白。將純化的GST-IFT46融合蛋白（純度95％以上）免疫新西蘭大白兔，采集第5次免疫后血液并分離血清進(jìn)行抗體純化及活性鑒定。間接ELISA測(cè)定結(jié)果表明抗血清效價(jià)大于1∶256000，進(jìn)一步將抗血清依次經(jīng)過Protein A、MBP-IFT46和硝酸纖維素膜三步親和純化，獲得了高特異性和靈敏度的多克隆抗體。用Western blotting和免疫熒光法檢測(cè)結(jié)果顯示，制備的多克隆抗體能夠很好的識(shí)別萊茵衣藻中IF

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