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文檔簡介
1、本文采用RT-PCR方法和cDNA末端快速擴增技術(shù)(RACE),從斜帶石斑魚(Epinepheluscoioides)下丘腦總RNA中進行擴增,得到斜帶石斑魚sbGnRHcDNA全序列。該cDNA全長408bp,編碼區(qū)285bp,所編碼的前體sbGnRH蛋白為94個氨基酸,包括22個氨基酸的信號肽、sbGnRH成熟十肽、加工位點(Gly-Lys-Arg)和GnRH聯(lián)合肽(GnRH-associatedpeptide,GAP)。同源性分析
2、表明,斜帶石斑魚sbGuRH與舌齒鱸(Dicentrarchuslabrax)sbGnRH同源性為72.3%,與鯔魚(Mugilcephalus)sbGnRH同源性為71.7%。進化樹分析表明,斜帶石斑魚sbGnRH與鱸形目的狼鱸科(條紋狼鱸和舌齒鱸)、鯛科(金頭鯛和真鯛)、石首魚科(波紋絨須石首魚和紅擬石首魚)魚類sbGnRH在同一進化支上的不同分支,與鯛科的金頭鯛和真鯛親緣性最近。采用兩步法RT-PCR結(jié)合Southernblot分
3、析對sbGnRH在斜帶石斑魚成體各組織、胚胎發(fā)育和幼體發(fā)育早期的表達情況進行了初步的研究。為了更好地了解GnRH在斜帶石斑魚中的生理功能,我們利用PCR方法從斜帶石斑魚垂體總RNA克隆了GnRH受體(GnRHR)的cDNA全長序列。為了獲取GnRHR抗體,通過免疫組織化學(xué)方法來檢測斜帶石斑魚GnRHR蛋白在體內(nèi)的表達分布水平情況,將斜帶石斑魚GnRHR的開放讀碼框(ORF)克隆于表達載體pET-22b。重組表達載體經(jīng)NdeI和XhoI雙
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