雞包涵體肝炎病毒部分血清型DNA探針的制備及其流行病學(xué)調(diào)查.pdf

1、雞包涵體肝炎(chickeninclusionbodyhepatitis，IBH)是由禽腺病毒引起的一種世界范圍內(nèi)的急性傳染病。主要發(fā)生于3-7周齡的肉雞，是由多種不同血清型的禽腺病毒引起的，可與其它的細(xì)菌病毒繼發(fā)或并發(fā)感染。禽腺病毒屬于禽腺病毒科禽腺病毒屬的成員，目前為止，人們發(fā)現(xiàn)有12個(gè)血清型的禽腺病毒與雞包涵體肝炎相關(guān)。其中與自然爆發(fā)的包涵體肝炎相關(guān)的血清型至少有10個(gè)。2型、3型、4型、5型、6型、7型和8型為引起雞IBH的主要

2、血清型。自然爆發(fā)的雞包涵體肝炎的特點(diǎn)為:病雞突然死亡，感染后3-4天為高峰期，5天后恢復(fù)正常，但有時(shí)會(huì)持續(xù)2-3周。主要表現(xiàn)為:嚴(yán)重貧血、肝臟腫大出血和壞死灶、黃疸、肝細(xì)胞核內(nèi)可見(jiàn)包涵體。我國(guó)于1976年首先在臺(tái)灣省發(fā)現(xiàn)該病，此后在江蘇省、湖南省、吉林省、遼寧省、河南省和內(nèi)蒙古都相繼發(fā)生，呈日益蔓延趨勢(shì)。雞包涵體肝炎給世界范圍內(nèi)的養(yǎng)禽業(yè)帶來(lái)了重大的損失。斑點(diǎn)雜交技術(shù)簡(jiǎn)單的操作以及較低的成本是檢測(cè)此病理想的選擇。雞禽腺病毒的最佳分離培養(yǎng)物

3、是雞胚，經(jīng)由卵黃囊接種后，胚胎可于2～7天內(nèi)死亡，在肝細(xì)胞中常可見(jiàn)嗜堿性核內(nèi)包涵體，其細(xì)胞核可較正常大2～3倍。
　　 將各血清型標(biāo)準(zhǔn)毒株通過(guò)雞胚卵黃囊接種對(duì)其進(jìn)行增殖培養(yǎng)，從NCBIGenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中禽腺病毒血清型3、5、6、7、9、10、11六鄰體蛋白基因的標(biāo)準(zhǔn)序列里，找出保守性序列和血清型之間同源性低的序列，用此段序列來(lái)設(shè)計(jì)7對(duì)引物。分別提取增殖的病毒的DNA，并進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到相應(yīng)大小的目的產(chǎn)物，目的條帶經(jīng)切膠回

4、收定量后，用地高辛標(biāo)記即為包涵體肝炎病毒核酸探針，將探針進(jìn)行靈敏度檢測(cè)后，可以得出探針的最小檢出量均達(dá)到5pg。通過(guò)特異性檢測(cè)可知各血清型探針之間不存在交叉反應(yīng)。建立斑點(diǎn)雜交的檢測(cè)方法，并用于檢測(cè)山東、江蘇、河南部分地區(qū)采集的病料，上述各地區(qū)均檢出陽(yáng)性病雞。
　　 通過(guò)實(shí)驗(yàn)，并結(jié)合師兄師姐前面所監(jiān)測(cè)的其他5種血清型，表明了雞包涵體肝炎病的普遍流行，其中以血清2、3、4、5、6、7、8型腺病毒的流行較為普遍，同之前的流行病學(xué)調(diào)查結(jié)