華東地區(qū)豬圓環(huán)病毒2型分子流行病學(xué)調(diào)查與遺傳變異分析.pdf

1、豬圓環(huán)病毒病(Porcine circovirus diseases，PCVD)包括由豬圓環(huán)病毒2型(Porcinecircovirus type2，PCV2)引起的一系列豬病，例如斷乳仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（Postweaning multisystemic wasting syndrome, PMWS）和豬皮炎與腎病綜合征（Porcine dermatis and nephropathy syndrome，PDNS）等。PCV2主要因

2、其侵害機(jī)體的免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致免疫抑制，繼而造成繼發(fā)感染，因此豬圓環(huán)病毒病給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。豬圓環(huán)病毒引起了全世界獸醫(yī)學(xué)者的普遍關(guān)注，相繼進(jìn)行研究。本研究對2009-2011年間采集自華東地區(qū)送檢的疑似PMWS豬血液或組織樣本進(jìn)行PCR檢測，掌握華東地區(qū)的PCV2流行情況;通過分離鑒定PCV2流行毒株和PCV2毒株的ORF2基因的比較分析，掌握PCV2地方株的多樣性和特性。本研究包括兩部分內(nèi)容:
　　 1.應(yīng)用PCR檢測

3、方法，對2009-2011年采集自山東、安徽、江蘇、上海、浙江、江西、福建7省市426份疑似PMWS豬血液和組織樣品進(jìn)行檢測。結(jié)果顯示，華東地區(qū)426份病料中，有230份為PCV2陽性，陽性率為54.0％;7省市送檢的樣品中均能檢測出PCV2陽性樣品，其中浙江陽性率最高為59.5％，福建陽性率最低為48.0％。結(jié)果表明華東地區(qū)豬群中普遍存在PCV2感染，且感染率較高。
　　 2.選取來自山東、安徽、江蘇、上海、浙江、江西、福建7

4、省市的24份PCV2陽性病料，經(jīng)處理后接種pK-15細(xì)胞，并進(jìn)行傳代。傳代過程中用PCR對分離株進(jìn)行鑒定，擴(kuò)增PCV2特異性目的條帶，證實(shí)獲得了16株P(guān)CV2分離株。間接免疫熒光檢測結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了16株P(guān)CV2毒株在pK-15細(xì)胞中獲得了增殖。通過對16株P(guān)CV2分離株進(jìn)行全基因組序列擴(kuò)增、克隆和測序，獲得了16株P(guān)CV2分離株的全長基因組序列。對這16株P(guān)CV2分離毒株與24株代表性PCV2毒株進(jìn)行ORF2基因同源性分析、系統(tǒng)進(jìn)化樹

5、分析和氨基酸序列分析。ORF2基因同源性分析結(jié)果表明，16株P(guān)CV2分離毒株與GenBank中其他24株已知參考毒株的ORF2基因同源性介于83.7％-100％之間，與華東地區(qū)21株已知參考毒株的ORF2基因同源性介于88.0％-100％之間，16株P(guān)CV2毒株之間的ORF2基因同源性為88.0％-100％?；蛐头治鼋Y(jié)果顯示，2009-2011年華東地區(qū)PCV2毒株存在3個(gè)基因型，即PCV2a、PCV2b和PCV2d，PCV2d基因型

6、相對PCV2a和PCV2b更為流行，但與地理位置無明顯相關(guān)性;ORF2氨基酸序列分析結(jié)果表明，16株P(guān)CV2分離毒株與GenBank中其他24株已知參考毒株相比，ORF2編碼的Cap蛋白存在3個(gè)變異度較高的主要區(qū)域53-91 aa、121-151aa和190-215aa，且相關(guān)抗原表位區(qū)域存在變異。這些突變位點(diǎn)是否影響病毒的生物學(xué)特性，還有待于進(jìn)一步研究。
　　 通過本研究掌握了華東地區(qū)豬群中PCV2的感染狀況和PCV2地方流行