魚類神經(jīng)壞死病毒流行病學(xué)調(diào)查、組織病理觀察及其衣殼蛋白基因在鳥類細胞中的表達.pdf

1、本文對赤點石斑(E.akaara)病毒性神經(jīng)壞死癥的病理學(xué)進行了研究.在光學(xué)顯微鏡下,在病魚的腦部、脊髓、視網(wǎng)膜可見明顯的空泡,腸的上皮層也觀察到空泡,其它器官,如鰓、心臟、肝臟、腎臟、脾臟、胰臟、皮膚、肌肉等沒有看見明顯的空泡.用兔抗擬鲹NNV衣殼蛋白血清作為第一抗體,進行免疫熒光觀察,病毒衣殼蛋白在腦部、視網(wǎng)膜和鰓上皮細胞內(nèi)可以觀察到強陽性反應(yīng),在肝細胞內(nèi)也觀察到弱的陽性反應(yīng),腸道上皮的熒光信號比腦部和視網(wǎng)膜的弱得多.地高辛探針原位

2、雜交法觀察結(jié)果,病毒核酸主要分布在腦部、脊髓、視網(wǎng)膜.脊髓部的陽性反應(yīng)最強,其次為腦部,再次為視網(wǎng)膜.在鰓、腸道上皮細胞和肝細胞中也觀察到陽性反應(yīng).透射電鏡下,在腦和視網(wǎng)膜的細胞質(zhì)中可以觀察到25~28 nm的病毒粒子.病毒隨機分布在細胞質(zhì)中或者包在一膜性結(jié)構(gòu)內(nèi),排列成晶格狀.病毒的衣殼蛋白和病毒的宿主特異性、侵染、流行、成熟、進化等密切相關(guān),因此對病毒衣殼蛋白的研究在疾病防治上具有重要意義.本文對赤點石斑神經(jīng)壞死病毒大亞灣株(RG-C

3、N)進行了純化,測定計算其浮力密度為1.3102~1.3243g/cm<'3>.成功地將RG-CN衣殼蛋白基因轉(zhuǎn)染到鳥類細胞中表達.將pcDNA3-CP7和pcDNA3-FL3轉(zhuǎn)染到雞肝腫瘤細胞(LMH)和人子宮頸癌細胞(HeLa),用免疫熒光和Western-blot法檢測蛋白表達,同時轉(zhuǎn)染綠色熒光蛋白(GFP)質(zhì)粒作為報告蛋白.本文通過改變β-巰基乙醇濃度,觀察RG-CN衣殼蛋白在SDS-PAGE中移動速度的變化.Western-b