大流行H1N1和季節(jié)性H1N1流感病毒的重配研究.pdf

1、目前,感染人類的流感病毒主要包括H1N1和H3N2流感病毒,其流行特征具有明顯的季節(jié)性,一般稱為季節(jié)性流感病毒。大流行H1N1流感病毒和季節(jié)性H1N1流感病毒的共存可能會導(dǎo)致其基因組的重配,產(chǎn)生高致病性的重配毒株,給公共健康帶來威脅。
　　為了探討大流行甲型(H1N1)流感病毒和季節(jié)性流感病毒H1N1基因重配的風(fēng)險(xiǎn),本研究對大流行H1N1和季節(jié)性H1N1流感病毒的重配進(jìn)行了研究。首先,利用流感病毒反向遺傳學(xué)方法將流感病毒的8個(gè)片段

2、的全長片段克隆至含有polI-polI雙向表達(dá)系統(tǒng)的PHW2000表達(dá)載體中,構(gòu)建2009大流行H1N1流感病毒的8個(gè)全長表達(dá)質(zhì)粒。由于血凝素(HA)和神經(jīng)氨酸酶(NA)是流感病毒的兩個(gè)主要的保護(hù)性抗原蛋白和流感病毒重配的主要的靶標(biāo),因此我們通過8質(zhì)粒轉(zhuǎn)染系統(tǒng)拯救出了聯(lián)合表達(dá)2009大流行H1N1流感病毒的HA和NA的rCA07/PR8及分別表達(dá)2009大流行H1N1流感病毒的NA或HA的r6CANA/PR8、r4CAHA/PR8三株重

3、配流感病毒。
　　在此基礎(chǔ)上,進(jìn)一步對重配病毒的體外生物學(xué)特征進(jìn)行了觀察。通過在MDCK細(xì)胞上對重配流感病毒的空斑形態(tài)、大小,病毒培養(yǎng)滴度,病毒的生長曲線的觀察,表明聯(lián)合表達(dá)HA和NA的重配流感病毒在體外的復(fù)制能力與野生型流感病毒無明顯差異,而只表達(dá)HA或NA的重配流感病毒相比于野生型流感病毒在MDCK細(xì)胞上的復(fù)制能力降低。
　　為了研究重配病毒的致病性特征,我們將重配病毒分別感染BALB/c成年小鼠,在BALB/c小鼠體內(nèi)

4、通過測定小鼠肺部病毒載量,小鼠MLD50,MID50,小鼠肺指數(shù),小鼠肺部病理損傷觀察等對重配流感病毒的生物學(xué)特性進(jìn)行了鑒定。我們的研究發(fā)現(xiàn)聯(lián)合表達(dá)2009大流行H1N1流感病毒的HA和NA基因和只表達(dá)2009大流行H1N1流感病毒HA基因的重配流感病毒在小鼠的肺部病毒載量顯著高于野生型的母本流感病毒,其LD50和MID50均顯著低于野生型的季節(jié)性H1N1流感病毒,其對小鼠肺部造成嚴(yán)重的損傷。
　　我們的研究結(jié)果表明:1,2009